海洋共附生抗菌微生物的筛选与鉴定及活性物质的研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:skyman9907
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随着抗生素的滥用,微生物的抗药性也在逐渐增强,甚至还会对人类自身产生危害。解决这一问题最有效的方法就是寻找新的抗菌物质。海洋因其资源丰富与独特的环境条件,已成为产天然活性物质的重要来源,而从海洋微生物中筛选出有抑菌活性的菌株是一项重要的前期工作。本研究从海参肠道内的海泥中分离得到136株细菌,从中筛选出1株能产生广谱抗菌物质的菌株B132,该菌对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌具有较强的抗性,抑菌活性较高,遗传稳定性较好,具有一定的开发价值。通过形态学鉴定与16S rDNA序列分析方法对菌株B132进行鉴定,最终将菌株B132鉴定为枯草芽孢杆菌。实验对该海洋枯草芽孢杆菌B132产活性物质进行了初步确定,蛋白分子质量范围检测,以及它对温度、酸碱度、紫外线照射和有机溶剂处理的稳定性,产酶特性做了系列。结果表明,经蛋白酶K检测后,能够确定菌株B132产的活性物质属于蛋白质;用60%饱和度的硫酸铵沉淀提取的粗蛋白,抑菌活性最高;采用超滤方法分离蛋白,并检测活性物质的分子量范围是大于50kD。菌株B132发酵液对高温具有一定的耐受性,有较宽的pH值适应范围,紫外线照射与有机溶剂对B132发酵液的抑菌活性影响很小。通过酪素平板、羧甲基纤维素钠平板、淀粉平板检测后,发现菌株B132具有产蛋白酶、纤维素酶以及淀粉酶的能力。本实验还对菌株B132的发酵条件做了研究,通过单因素实验与正交设计实验,得到了适合菌株B132发酵的最佳的培养条件:发酵液初始pH=8,接种量为5%,培养温度为28℃,培养时间48h。通过正交数据可知影响菌株B132发酵产生抗菌活性物质的主次因素。
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