论文部分内容阅读
近年来,科学家们一直致力于探索肝癌治疗的理想策略。目前,肝癌的治疗以外科手术切除为主,但难以清除肝癌微小病灶,而其又是肝癌复发和转移的根源。因此,探索根除肝癌微小病灶治疗策略,成为目前急待解决的关键问题。肿瘤过继免疫疗法是将体外诱导的具有抗肿瘤活性的免疫细胞输注给肿瘤患者的被动免疫治疗方法。它可以打破机体的免疫耐受,激活机体杀伤肿瘤细胞的功能,是当前肿瘤免疫治疗的主要研究方向。肿瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)过继治疗法往往采用加载肿瘤特异性抗原肽的抗原提呈细胞对患者的外周血单个核细胞进行诱导和扩增获得肿瘤抗原特异性CTL后再回输体内进行治疗。但是回输进体内的CTL受到体内免疫抑制环境等因素影响难以到达肿瘤局部和活性降低。干扰素诱生蛋白-10(Interferon-inducible protein-10, IP-10)能有效趋化T细胞到肿瘤局部并能增强其抗肿瘤活性,但是需要增强其在肿瘤局部富集。黑色素瘤抗原A1(melanoma antigen-Al, MAGE-A1)在肝癌组织特异性高表达,是一种潜在的肝癌诊治靶点。MAGE-A1蛋白来源的抗原肽KVLEYVIKV(本论文中命名为pMAGE-A1278-286)可被HLA-A*0201分子递呈,被pMAGE-Al278-286CTL识别和特异性得杀伤相应肿瘤细胞。HLA-A2-pMAGE-Al278-286四聚体是鉴定和分析诱导的pMAGE-Al278-286特异性CTL的重要工具。因此本研究首先进行HLA-A2-pMAGE-Al278-286四聚体的构建和pMAGE-Al278-286特异性CTL的诱导和分析,肝癌患者肿瘤组织四聚体原位染色和分析。然后在建立人肝癌BALB/c裸鼠模型基础上,研制包裹hIP-10基因叶酸修饰的壳聚糖纳米粒(folate-modified chitosan nanoparticles coating the human IP-10gene, FA-CS-hIP-10)促进pMAGE-Al278-286特异性CTL治疗肝癌并进行相关机制研究。研究结果表明HLA-A2-pMAGE-Al278-286四聚体构建成功,能有效鉴定诱导的pMAGE-Al278-286特异性CTL。而且成功研制出了FA-CS-hIP-10,可以有效促进pMAGE-Al278-286特异性CTL治疗肝癌的效果。并进一步明确了FA-CS-hIP-10通过刺激体内T细胞活性因子IFN-γ分泌增多,抑制肝癌血管生成,抑制肿瘤细胞增殖和促进肿瘤细胞凋亡等机制来达到抗肝癌作用。我们的研究为提高肝癌特异性CTL在体内的活性提供了新的方法,为肝癌免疫治疗奠定理论基础。