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背景近年来,糖尿病患病率明显升高。糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)作为糖尿病最常见的并发症之一,患病人数也不断攀升,已成为导致终末期肾脏病(End Stage Renal Disease,ESRD)的主要原因。糖尿病肾病发生、发展的机制十分复杂,包含免疫炎症反应、氧化应激、自噬、血流动力学改变、代谢异常以及表观遗传学等多方面。微小RNA(microRNA,miRNA)是一种由18-22个核苷酸组成的的非编码RNA,大量实验证实,miRNA参与细胞增殖分化、细胞凋亡、免疫反应、肿瘤发生等多种病理生理过程。有研究发现在局灶节段性肾小球硬化(Focal Segmental Glomerulosclerosis,FSGS)中上调miR-193a可使足细胞标记蛋白Wilms肿瘤蛋白1(Wilms’tumor 1,WT 1)表达减弱,并且能促进蛋白尿的形成,因此猜想miR-193a可通过调控WT 1来影响肾脏病的进展。同时我们的前期研究发现,使用氯沙坦干预后的糖尿病肾病小鼠的尿蛋白水平较糖尿病肾病组小鼠相比明显降低、WT 1的表达增多且肾脏病变减轻,而肾组织中的miR-193a的表达也降低,猜想miR-193a可能介导糖尿病肾病肾脏的损伤。糖尿病肾病的发生发展与代谢异常有密切的关系,载脂蛋白L 1(Apolipoprotein L 1,APOL 1)是APOL基因家族的成员,其基因存在变异型G1和G2,主要参与脂质的转运和代谢,当APOL 1表达异常时可导致血脂发生改变。近年来多项研究表明APOL1变异基因型与多种肾脏病有关,并且有实验显示在壁层上皮细胞中APOL 1和miR-193a之间存在相互反馈调节的关系,但两者在糖尿病肾病患者体内是否仍存在这种关系还有待进一步研究。在这项研究中,我们观察了APOL 1、miR-193a及WT 1在糖尿病肾病患者肾组织中的表达趋势及与临床指标之间的相关性,探索其在糖尿病肾病肾脏损伤中发挥的作用,为延缓糖尿病肾病的进展提供新的思路。方法1标本的收集人肾组织标本:取自2018年1月至2018年4月期间在郑州大学第一附属医院住院患者的肾组织样本,共纳入30例,其中患2型糖尿病且肾穿刺活检确诊为糖尿病肾病的肾组织有15例,来源于肾脏肿瘤患者肿瘤旁正常肾组织有15例。2实验方法(1)PAS染色:对肾组织的石蜡切片进行PAS染色处理,观察光镜下肾组织病理改变。(2)电镜:透射电镜下观察肾小球基底膜厚度和足突形态的改变。(3)免疫荧光染色:对肾组织的石蜡切片进行免疫荧光染色,并对APOL 1和足细胞标记物WT 1进行定性检测。(4)免疫组织化学染色:对肾组织的石蜡切片进行免疫组织化学染色,对足细胞标记物WT 1进行定性及定量检测。(5)qRT-PCR:通过qRT-PCR方法检测肾组织中APOL 1、miR-193a和WT1的表达量。(6)数据分析:采用SPSS 17.0软件进行统计学数据分析,对于独立的两组二分类比较使用χ~2检验;对于两组独立样本间比较符合正态分布且方差齐时采用t检验,若符合正态分布但方差不齐时采用校正的t检验,若为非正态分布是采用Wilcoxon秩和检验。通过以上方法对两组人口学指标信息和临床指标进行统计学分析。根据糖尿病肾病肾小球病变分级标准对miR-193a、APOL 1和WT1相对表达水平进行分组,采用LSD-t检验对各组间指标表达的差异进行统计学分析。采用Spearman秩相关系数方法对miR-193a与WT 1,miR-193a与APOL1间相关性及尿蛋白与三者相关性分析。以α=0.05作为检验水准,当p<α时认为差异具有统计学意义。结果(1)相对于对照组,糖尿病肾病患者具有较高的血糖(p<0.001)、胆固醇(p=0.037)和甘油三酯水平(p=0.003),其血肌酐较高(p<0.001)、尿蛋白水平较高(p<0.001),高血压病的发生率较高(p<0.01)。(2)PAS和电镜结果显示糖尿病肾病患者肾小球体积肥大,并出现系膜基质增多、基底膜增厚及肾小球足突广泛融合病理改变。(3)在人肾组织中,与对照组相比,糖尿病肾病患者肾小球中APOL 1和足细胞标记物WT 1表达均减少,miR-193a表达明显升高。(4)糖尿病肾病患者肾组织中miR-193a的表达与WT 1呈负相关(r_s=-0.563p=0.029),与APOL 1间未存在相关性。(5)随着糖尿病肾病病变加重,肾组织中miR-193a的表达水平升高显著,而WT 1和APOL 1改变无统计学意义。(6)在糖尿病肾病患者中,尿蛋白水平与miR-193a、APOL 1及WT 1的相关性较高,ACR与miR-193a相对表达呈正相关(r_s=0.532 p=0.041),与APOL1(r_s=-0.661 p=0.007)及WT 1(r_s=-0.750 p=0.001)相对表达呈负相关。结论(1)miR-193a在糖尿病肾病肾组织中表达升高,而APOL 1及WT 1表达下降,三者与尿蛋白水平存在相关性。(2)糖尿病肾病患者肾组织中miR-193a的表达与WT 1呈负调节关系,而与APOL 1无相关性。(3)随着糖尿病肾病病变加重,肾组织中miR-193a的表达水平升高显著。miR-193a可能介导糖尿病肾脏病的进展,与糖尿病肾病肾脏损伤有关。