环棘鞭蛇尾(Ophiomastix annulosa)皂苷的制备及其生物活性研究

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本论文以环棘鞭蛇尾(Ophiomastix annulosa)作为实验材料,全面分析了烟台崆峒岛海域的环棘鞭蛇尾(整体)的营养成分,研究了环棘鞭蛇尾皂苷的最佳提取工艺,测定了环棘鞭蛇尾皂苷的理化性质,对环棘鞭蛇尾皂苷进行了分离纯化,并且对其抗氧化活性、抑菌活性、溶血活性和抗肿瘤活性进行了研究。营养成分分析结果:水分含量为2.55%,灰分含量为45%,蛋白质含量为19.04%,总糖含量为1.72%,粗脂肪含量为2.20%,其中多不饱和脂肪酸含量丰富,二十碳五烯酸(EPA)和花生四烯酸(AA)的含量较高,占总脂肪酸的17.87%。人体必需氨基酸占氨基酸总量的25.39%,无机元素中Ca含量最高。因此,环棘鞭蛇尾(整体)营养成分丰富,具有良好的开发利用价值。采用单因素实验结合正交试验对环棘鞭蛇尾皂苷的提取工艺进行研究,结果表明,提取环棘鞭蛇尾皂苷的最佳条件为:85%的乙醇溶液浸提,提取温度为55℃,提取料液比为1:20,重复提取3次,并且验证实验的结果与实验设计基本一致。采用溶剂浸提法得到环棘鞭蛇尾粗皂苷,然后依次用水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇经过大孔树脂AB-8分离纯化除去多糖和无机盐,收集各洗脱部分。80%的乙醇洗脱组分进行硅胶柱层析,经TLC(thin layerchromatography)点板得到单一组分。通过物理化学方法对环棘鞭蛇尾皂苷进行鉴定,表明环棘鞭蛇尾皂苷是甾体皂苷;与标准皂苷进行比较,在200-800nm波长范围内进行紫外扫描,得到在216nm处有最大吸收峰,在400-4000cm-1范围内进行红外扫描,结果说明环棘鞭蛇尾皂苷是25R异螺甾烷醇型。溶血活性实验表明,环棘鞭蛇尾皂苷具有溶血活性。这种活性在消除血栓、预防心血管疾病等方面有着积极的意义,具有研究价值和开发前景。采用滤纸片法测定结果表明环棘鞭蛇尾皂苷对供试菌均有一定的抑制作用,其中大肠杆菌(Escherichia coli)表现为最敏感,金黄色葡萄球菌(Staphyloccocusaureus Rosenbach)表现为中度敏感,而啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiaeHansen)、黄曲霉(Aspergillus flavus)表现为低度敏感。环棘鞭蛇尾皂苷对四种供试菌的最低抑菌浓度(MIC)依次为:0.5mg/mL、1.0mg/mL、4.0mg/mL和2.0mg/mL。采用MTT法测定环棘鞭蛇尾皂苷的抗肿瘤活性。结果表明,环棘鞭蛇尾皂苷对肿瘤细胞HCT-116、MCF-7、LnCAP、HCT-15具有显著的抑制作用,对RM-1、Acan有抑制作用,但是效果不显著。实验结果表明,HCT-116、MCF-7、LnCAP、HCT-15四种肿瘤细胞对皂苷样品表现出了很强的敏感性。由此说明,筛选出环棘鞭蛇尾皂苷对四种肿瘤细胞HCT-116、MCF-7、LnCAP、HCT-15具有抗肿瘤作用,为动物皂苷的抗肿瘤研究提供了理论基础。环棘鞭蛇尾皂苷的抗氧化活性实验主要包括总还原力的测定,清除羟基自由基和超氧阴离子的测定,得出其具有显著的抗氧化活性。测得环棘鞭蛇尾皂苷的总还原力的OD值为1.31,由此说明环棘鞭蛇尾皂苷具有抗氧化能力。根据环棘鞭蛇尾皂苷对氧自由基的清除作用的结果得出结论:环棘鞭蛇尾皂苷对羟自由基、超氧阴离子自由基具有清除作用。
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