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妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoproteins，PAGs)是在哺乳动物妊娠后胎盘胎儿子叶中分泌的一种酸性特异性糖蛋白，在家畜妊娠过程中发挥着重要的作用。通过利用PAGs的特异性识别对家畜进行早期妊娠诊断，可以尽早的判断是否妊娠以淘汰空怀母畜，获得比B超检测更为理想的效果。因此，PAGs对畜牧业的发展有着极其重要的意义。 本研究应用原核表达生物工程技术制备绵羊妊娠相关糖蛋白(PAG3)，将获得的目的蛋白通过免疫家兔制备绵羊妊娠相关糖蛋白(PAG3)多克隆抗体，为进一步对绵羊妊娠相关糖蛋白试剂盒的开发奠定理论基础和科学依据。 根据GenBank登录的绵羊PAG3基因序列，采用基因合成的方法合成PAG3序列并构建pUC57-PAG3载体。使用PCR扩增的方法获得了带有Nde1和Xho1酶切位点的绵羊PAG3编码基因。然后将扩增产物和pET20b载体分别进行双酶切，使用T4DNA连接酶将两者连接，构建pET20b-PAG3质粒，并将其接种到表达菌株BL21(DE3)感受态中。使用IPTG诱导剂对表达菌样进行诱导，通过对培养条件的不断优化，获得融合His标签的绵羊PAG3。通过使用Ni-Agarose Resin亲和层析柱对经超声波处理后的蛋白进行纯化获得融合蛋白纯品，使用SDS-PAGE检测重组蛋白的表达效果。使用获得的带有His标签的绵羊PAG3，等比例的与弗氏佐剂充分乳化混匀后，皮下多点注射免疫新西兰白兔制备绵羊PAG3多克隆抗体。以获得的融合His标签绵羊妊娠相关糖蛋白作为包被原，使用间接ELISA的方法对抗体效价进行检测，并使用Weatern Blot的方法检测抗体血清的特异性结合能力。 本试验利用原核表达生物技术成功构建了pET20b-PAG3载体。大肠杆菌表达菌株时，在37℃条件下的最佳表达条件是:IPTG诱导剂浓度为1 mmol/mL，诱导时间为4h。在此条件下获得了融合His标签的绵羊PAG3，PAG3样品的分子量大小为43kDa，与实际推算的相一致。使用获得的绵羊PAG3免疫新西兰兔，并且通过ELISA检测兔抗血清效价达到了1∶27000，使用Weatern Blot检测抗体能够特异性结合绵羊PAG3。 综上所述，本研究获得了带有His标签的绵羊PAG3重组蛋白，以此重组蛋白免疫家兔，制备了绵羊妊娠相关糖蛋白PAG3多克隆抗体。