目的:乳腺癌是是女性最常见的恶性肿瘤,是发展中国家癌症死亡的最常见原因,在发达国家其死亡率仅次于肺癌。更糟糕的是,乳腺癌患者逐渐对现有的治疗方法产生了耐药性。为了实现长期的疾病控制,迫切需要发现和开发新的、有效的癌症药物。近年来,癌症免疫治疗在造血和实体肿瘤的治疗中显示出了良好的潜力。越来越多研究表明微生物及其代谢产物表现出抗肿瘤的作用。ΔA146Ply是肺炎链球菌溶血素的减毒突变体,我们之前的研究证明ΔA146Ply具有作为免疫调节剂的潜力,但其是否具有抗乳腺癌作用尚不清楚。小檗胺（BBM）是从传统中药三颗针中分离得到的一种天然双苄基异喹啉生物碱。在乳腺癌的研究中,BBM已被证明能够抑制肿瘤细胞的生长、迁移和侵袭。但BBM是否抑制乳腺癌的体内生长仍有待证实。在本研究中,我们旨在探寻ΔA146Ply与BBM发挥抗乳腺癌的疗效及作用机制,为乳腺癌的治疗提供了一种新的选择,为ΔA146Ply作为抗肿瘤药物的开发奠定理论基础。方法:为明确ΔA146Ply和BBM体外的抗乳腺癌效应,我们分别用CCK8实验检测细胞的增殖,流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期分布,Western Blot法检测细胞增殖和凋亡相关细胞内蛋白的表达,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。为明确ΔA146Ply和BBM体内抗乳腺癌效应,将4T1细胞皮下接种到BALB/c小鼠中来构建同种异体小鼠乳腺肿瘤模型。通过比较生理盐水对照组,ΔA146Ply和BBM单独及联合用药组肿瘤体积,小鼠体重和生存率来评估联合疗法在体内的效应。为初步探索ΔA146Ply和BBM在体内发挥抗乳腺癌的作用机制,使用免疫组化（IHC）和TUNEL实验分析治疗后第9天和第15天肿瘤组织的增殖和凋亡,通过流式细胞术对肿瘤浸润的髓系和淋巴细胞亚群进行分析,采用ELISA法检测肿瘤组织和血清中的细胞因子。并通过血清生化分析和肿瘤病理学分析评估ΔA146Ply和BBM在体内的毒性。结果:体外实验结果表明,ΔA146Ply和BBM联合使用可显著抑制乳腺癌细胞的增殖,降低增殖相关信号p-Akt和p-ERK的水平。联合治疗后,凋亡的乳腺癌细胞百分率和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（CC3）裂解水平增加,表明联合治疗可诱导乳腺癌细胞凋亡。细胞周期分布分析表明,联合治疗使得人乳腺癌细胞周期阻滞在G1期,小鼠乳腺癌细胞周期阻滞在S期。Transwell分析表明,联合疗法可显着抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭。体内实验结果表明,联合用药组的肿瘤体积明显小于对照组。尽管联合治疗不能改善荷瘤小鼠的整体存活率,但延长了它们的平均生存时间。这四组小鼠的体重没有显著差异,表明荷瘤小鼠可以耐受ΔA146Ply或BBM治疗。免疫组织化学（IHC）分析和TUNEL实验结果显示,联合治疗在体内可抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。细胞因子分析显示联合治疗组血清IFN-γ水平明显升高。流式细胞术分析显示在治疗后第9天和第15天,联合治疗组中CD4-CD8-T细胞比例显著增加,Treg细胞比例明显减少。这些结果提示了ΔA146Ply和BBM联合治疗活化了系统性抗肿瘤免疫反应。血清生化和病理分析表明,联合治疗对荷瘤小鼠没有明显的肝肾毒性,减轻了荷瘤小鼠的肺损伤,并有效地抑制了肿瘤转移。结论:综上所述,本研究确定了ΔA146Ply和BBM联合治疗的有效性和安全性。体外实验结果表明,ΔA146Ply和BBM联合治疗可显著抑制乳腺癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期,抑制肿瘤细胞迁移和侵袭。体内实验结果表明,联合治疗有效地活化系统性抗肿瘤免疫反应,延长了荷瘤小鼠的平均生存时间。我们的研究为乳腺癌,特别是三阴性乳腺癌提供了新的治疗选择。