番鸭呼肠孤病毒（Muscovy duck reovirus,MDRV）病是一种高发病率、高致死率的番鸭传染病。自暴发以来,已给番鸭业造成严重的经济损失,成为制约我国番鸭业健康发展的主要疫病之一。目前国内外有关MDRV疫苗的研究报导仅见于福建省农业科学院畜牧兽医研究所选育的番鸭呼肠孤病毒弱毒株,该弱毒活疫苗具有良好的保护率,在有效防制番鸭呼肠孤病毒病中发挥了重要作用。但弱毒苗往往存在着水平排毒、毒力返强等安全性问题。因此有必要研制更安全、有效的疫苗。本实验以此为目的,构建了番鸭呼肠孤病毒σC编码基因重组腺病毒载体,并在AD293细胞上组装了重组腺病毒,为今后研究σC编码基因重组腺病毒疫苗奠定技术基础。根据已知的番鸭呼肠孤病毒MW9710分离株σC编码基因的核苷酸序列设计一对PCR引物,从σC编码基因重组T载体质粒中扩增出目的片段,构建了两端分别添加有Kpn I和Not I位点的σC编码基因片段。将Kpn I、Not I双酶切处理后的目的基因片段和pShuttle-CMV穿梭载体经过粘性末端连接,构建了含有σC编码基因的pShuttle-CMV-σC重组载体。pShuttle-CMV-σC阳性质粒经Pine I线性化后,电转化BJ5183感受态细胞,与pAdEasy-1骨架载体同源重组,构建成pAdCMV-σC重组腺病毒载体。pAdCMV-σC重组腺病毒载体经Pac I线性化后转染AD293细胞。转染后的AD293细胞于第7天产生病变,表明已在AD293细胞上组装了重组腺病毒。重组病毒经连续传代、PCR鉴定验证,表明σC编码基因能稳定地存在于重组腺病毒基因组中。有限稀释法测定结果表明重组病毒TCID₅₀为10⁹TCID₅₀/ml。