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目的:本文旨在揭示强心苷类药物—地高辛抗非小细胞肺癌的作用及机理,进而研究地高辛与阿霉素联用的体内外抗肿瘤效果及机制。为地高辛单独或作为增敏剂应用于临床抗肿瘤治疗提供科学依据。方法:1.采用MTT法评价地高辛、阿霉素及两药联用对非小细胞肺癌A549、H1299细胞的增殖抑制作用。2.利用Chou-Talalay法评价地高辛、阿霉素联用对A549、H1299细胞的协同抗增殖作用。3.采用流式细胞术检测地高辛对A549、H1299细胞周期阻滞、凋亡、活性氧产生的影响,及地高辛与阿霉素联用对A549细胞凋亡的影响。4.采用Western blot及免疫荧光法检测地高辛单用及地高辛与阿霉素联用对DNA损伤修复相关蛋白γ-H2AX、RAD51、XRCC1、RPA表达的影响。5.构建斑马鱼肿瘤模型,采用荧光定量法检测地高辛单用及地高辛与阿霉素联用的体内抗肿瘤效果。6.建立裸鼠移植瘤模型,通过测量肿瘤重量、体积、组织形态等方法,评价地高辛、阿霉素及两药联用的体内抗肿瘤作用。结果:1.地高辛、阿霉素均剂量依赖性抑制A549、H1299细胞的增殖。结果显示,地高辛作用于A549、H1299细胞24 h的IC50值分别为0.10μM、0.12μM,作用48 h的IC50值分别为0.037μM、0.054μM;阿霉素作用于A549、H1299细胞48 h的IC50值分别为0.14μM、0.95μM。2.地高辛剂量依赖性诱导A549细胞凋亡、增加细胞内活性氧的产生,对A549、H1299细胞均有周期阻滞作用,分别将A549、H1299细胞阻滞在G0/G1、G2/M期。3.地高辛剂量依赖性抑制DNA损伤修复,进而增加DNA损伤。地高辛促进DNA单链及双链损伤标记蛋白RPA、γ-H2AX的表达,同时抑制DNA单链及双链损伤修复蛋白XRCCI、RAD51的表达。4.地高辛与阿霉素联合用药作用于A549、H1299细胞均具有协同抗肿瘤作用。两药联用48 h对A549、H1299细胞产生协同抗肿瘤作用的比例分别1/2×IC50Digoxin:IC50 ADR和IC50 Digoxin:IC50 ADR,该浓度比例下两药联用可显著抑制DNA单链修复蛋白PARP、XRCC1的表达。另外,两药联用发挥协同抗肿瘤作用时,可引起A549细胞的凋亡。5.地高辛可剂量依赖性抑制斑马鱼中移植A549肿瘤细胞的生长,当其浓度高于0.925μM后具有显著性差异。0.37μM地高辛与2.8μM阿霉素联用与该浓度下两药单用相比能显著性的抑制肿瘤增长。6.地高辛与阿霉素联合给药组与对照组、地高辛、阿霉素单独给药组相比,裸鼠体内肿瘤体积显著变小。联合给药组与其他组相比可大量肿瘤细胞坏死,胞核碎裂溶解或固缩深染。结论:1.地高辛可抑制体外A549、H1299细胞的增殖,其作用机制可能与抑制DNA单双链损伤修复相关。2.地高辛与阿霉素联合作用于体外A549、H1299细胞可产生较强的协同抗增殖作用,其机制可能与抑制DNA单链修复蛋白PARP、XRCC1的表达相关。3.地高辛与阿霉素联用的体内抗肿瘤效果优于两药单用。