猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。PRRSV GP5目前被认为是研制PRRS新型分子诊断试剂和新型疫苗的良好材料。“自杀性”DNA疫苗不仅具有常规DNA疫苗易制备、运输、保存等优点,还具有安全性与有效性。菌蜕是没有细胞内容物的革兰氏阴性菌的细胞膜,它可以靶向于免疫系统并作为免疫佐剂。另外,菌蜕可作为呈递蛋白、药物、DNA、和其他水溶物的载体。鉴于此,本课题以菌蜕作为载体,与表达PRRSV ORF5基因的“自杀性”DNA疫苗制备成PRRSV“自杀性”DNA菌蜕复合疫苗,再进行小白鼠的免疫试验。主要研究内容如下:通过RT-PCR扩增采自重庆地区不同猪场高热病病猪肺组织样本中PRRSV的ORF5全序列,并将该序列克隆进pMD18-T载体进行测序。结果8个样本中有5个成功扩增出大小为603bp的ORF5全序列。系统进化分析表明它们与国内2006-2007年间的分离株亲缘关系较近,而与更早的分离株和疫苗株MLV亲缘关系较远。此外,推导氨基酸序列分析表明:重庆地区流行的PRRSV与以JXAl等为代表的同期其它地区分离株相比较,在ORF5的两个线性抗原表位中存在独特性变异。将测序后的ORF5用带有酶切位点的引物扩增,再克隆进pMD18-T载体。经菌落PCR和酶切鉴定后,再亚克隆到“自杀性”DNA疫苗载体pSMART2a上。菌落PCR和酶切鉴定证明重组质粒pSMART-ORF5包含完整的ORF5基因,成功构建PRRSV自杀性DNA疫苗。将冻干的菌蜕重悬于含质粒pSMART-ORF5的PBS缓冲液中。用PBS洗涤沉淀5次,分别测定五次上清的OD₂₆₀,以确定装入菌蜕的pDNA量。结果发现:孵育10min已足够,延长装载时间（至3h）,不会增加装载量。最后装入菌蜕的量约为最初投入量的12%。在PCR扩增及TA克隆后,将编码N端缺失30个氨基酸残基的tORF5（truncated ORF5）序列亚克隆至原核表达质粒pRSETA上。诱导后,tORF5在大肠杆菌BL21里的表达产物经过SDS-PAGE分析,证实为tGP5与6联组氨酸（6xHis）的融合蛋白,分子量约为23kDa,表达量占菌体总蛋白的15%,主要以包涵体形式存在。用自杀性DNA疫苗及菌蜕复合疫苗注射（?）小鼠后,用间接ELISA方法测定其血清里的抗体水平。试验结果初步说明相比PRRSV自杀性DNA疫苗,PRRSV自杀性DNA菌蜕复合疫苗可以刺激机体产生更为有效的体液免疫反应。并且相比肌肉注射PRRSV自杀性DNA菌蜕复合疫苗,腹腔注射能诱导机体产生更有效的体液免疫反应。