【摘 要】
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蜱虫是一种节肢动物,在全球范围内,其所传播的病原体种类较多,可以吸食包括人类在内的哺乳动物、鸟类和爬行动物的血液,从而传播各种疾病。无形体是一种蜱传的专门寄生在动物细胞内的立克次氏体,多种无形体还是人畜共患病原体,对人类和动物健康乃至畜牧业的发展都会产生较大的影响。近年来,我国养犬数量也不断增多,犬科动物与人类活动密切相关,犬一旦被蜱虫叮咬,也会增加人类感染蜱媒疾病的危险。因此,有必要在海南地区开
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蜱虫是一种节肢动物,在全球范围内,其所传播的病原体种类较多,可以吸食包括人类在内的哺乳动物、鸟类和爬行动物的血液,从而传播各种疾病。无形体是一种蜱传的专门寄生在动物细胞内的立克次氏体,多种无形体还是人畜共患病原体,对人类和动物健康乃至畜牧业的发展都会产生较大的影响。近年来,我国养犬数量也不断增多,犬科动物与人类活动密切相关,犬一旦被蜱虫叮咬,也会增加人类感染蜱媒疾病的危险。因此,有必要在海南地区开展犬无形体病和犬寄生蜱的调查研究。本试验以犬和犬体表蜱作为研究对象,对犬血液样本进行无形体的PCR检测,并进行统计学分析和系统发育分析;对犬体表寄生蜱进行形态学和分子生物学的鉴定,并用PCR的方法检测犬蜱是否携带无形体病原。其结果如下:(1)本试验在海南18个市县共采集了1051份犬血液样本,通过巢氏PCR和普通PCR方法对无形体进行分子检测。结果发现犬无形体的总感染率为9.4%(99/1051)。不同种类的无形体感染率不同。嗜吞噬细胞无形体、牛无形体、扁平无形体的感染率分别为1.0%(11/1051)、2.7%(28/1051)、6.0%(63/1051),其中扁平无形体的感染率最高,是犬中的优势病原。不同地区无形体的感染率也有差异。在东方市和五指山市没有检测到无形体病原。另外还发现了3例无形体混合感染的情况。我们基于犬的性别、年龄、饲养种类、是否使用杀虫剂以及是否感染蜱虫这些因素对无形体的感染情况进行了统计学分析。结果表明,年龄、饲养种类、是否使用杀虫剂以及是否感染蜱虫都与无形体的感染率具有统计学意义。(2)本试验共采集了犬体表蜱虫546只,通过形态学鉴定和线粒体16S r RNA基因扩增进行分子生物学鉴定,结果表明两种方法的鉴定结果一致,所有蜱虫均为血红扇头蜱。对蜱虫序列进行测序并构建系统发育树,两个蜱虫序列处于不同的进化分支。另外基于核糖体16S r RNA基因和柠檬酸合酶gltA基因检测蜱虫中是否携带无形体,结果只检测到扁平无形体这一种病原,其阳性率为1.1(6/546),未检测到嗜吞噬细胞无形体和扁平无形体。(3)基于16Sr RNA/gltA基因对三种无形体进行系统发育树的构建,11株犬源嗜吞噬细胞无形体序列分别聚于不同的分支,DA41、DA59、DA61、DA80分布在同一类群中,与来自斯洛伐克的蓖麻硬蜱(GU724963)、波兰的野禽(GQ450278)、土耳其的牛(KP745629)中的嗜吞噬细胞无形体的序列相近。DA4和DA29与来自新疆的绵羊参考株(KT944029)和河南牛(OL884226)参考株序列相近。WN4、BT9、BT12、HK8与来自湖北的山羊序列(JN558813)遗传距离相近。BT-8单独聚于一支,与来自河南的蜱虫(MN097866)分离株序列相近。6株犬源牛无形体序列分布在不同的类群。SY02、CM07、HK16与韩国长角血蜱中的牛无形体接近。DA61与韩国的荷斯坦奶牛参考株遗传距离相近。而WC08和TJ18和我国河南省的牛参考株出现在另一类群中。犬源和蜱源扁平无形体的同源性较高,均聚在同一类群中。综上所述,本研究检测到了海南地区犬携带不同种无形体的感染情况,并针对相关危险因素进行了统计学分析,针对不同基因进行了种系发育分析;鉴定出了犬体表蜱虫种类为血红扇头蜱,并对蜱种进行了系统发育分析,调查了犬蜱携带无形体病原的情况,丰富了海南地区犬体表寄生蜱种的数据,也为蜱传无形体病的监测和预防提供了基础资料。
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