西黄丸对H--P--O轴离体细胞及增殖乳腺上皮细胞的作用研究

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目的:
  通过研究西黄丸含药血清对下丘脑-垂体-卵巢轴上的下丘脑神经元细胞、腺垂体细胞、卵巢颗粒细胞分泌激素及受体功能的影响,西黄丸含药血清对E2、P干预的乳腺上皮细胞的影响,探讨西黄丸对下丘脑-垂体-卵巢轴的调节作用,阐明抗乳腺增生的作用机制。
  方法:
  取SD雌性未孕大鼠,分为空白组、他莫昔芬组1.8mg?kg-1?d-1剂量组、西黄丸2.16g?kg-1?d-1剂量组、西黄丸1.08g?kg-1?d-1剂量组、西黄丸0.54g?kg-1?d-1剂量组,给予灌胃7天,取血,制备含药血清。取SD大鼠,分别进行下丘脑神经元细胞、腺垂体细胞、卵巢颗粒细胞分离培养,将各细胞分别分为空白组、他莫昔芬组、西黄丸高、中、低剂量组。各细胞给予相应的含药血清后进行检测。下丘脑神经元细胞:CCK-8法检测细胞存活率;ELISA法检测GnRH含量;Western blot检测kisspeptins-1、GPR54的蛋白表达量。腺垂体细胞:CCK-8法检测细胞存活率,ELISA法检测FSH、LH含量,Western blot检测GnRHR蛋白表达量。卵巢颗粒细胞:CCK-8法检测细胞存活率;ELISA法检测E2、P含量;Western blot检测FSHR、LHR蛋白表达量。将分离培养的乳腺上皮细胞给予E2、P干预,使用CCK-8法筛选最适增殖浓度。将细胞分为空白组、增殖组、他莫昔芬组、西黄丸高、中、低剂量组,除空白组外均给予最适浓度E2、P干预,给药后进行以下检测:CCK-8法检测细胞抑制作用,Giemsa染色观察细胞形态变化,流式细胞技术检测细胞凋亡率,免疫组化法检测细胞Bax、Bcl-2表达,Western Blot检测细胞ERα、ERβ、PR蛋白表达量。
  结果:
  1.西黄丸含药血清对下丘脑神经元细胞、腺垂体细胞、卵巢颗粒细胞存活率未有影响。西黄丸高、中、低及他莫昔芬组可降低下丘脑神经元细胞GnRH激素含量(P<0.01),抑制kisspeptins-1、GPR54蛋白表达(P<0.01);可降低腺垂体细胞FSH激素含量(P<0.01),升高LH激素含量(P<0.01),抑制GnRHR蛋白表达(P<0.01);可降低卵巢颗粒细胞E2激素含量(P<0.01),升高P激素含量(P<0.01),抑制FSHR蛋白表达(P<0.01),促进LHR蛋白表达(P<0.01)。
  2.西黄丸含药血清可明显抑制E2、P干预后的大鼠乳腺上皮细胞增殖(P<0.05),诱导其凋亡,影响凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达(P<0.05),并有效抑制雌激素受体ERα、ERβ表达。
  结论:
  1.西黄丸可影响下丘脑神经元细胞、腺垂体细胞、卵巢颗粒细胞的分泌功能。
  2.西黄丸抑制乳腺上皮细胞增殖,并促进乳腺上皮细胞凋亡。
  3.西黄丸调节下丘脑-垂体-卵巢轴起到抗乳腺增生作用。
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