SOX9与Ⅱ型胶原在小鼠MSCs三系分化中的实验研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sme_william
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目的:通过成骨、成软骨、成脂肪诱导干细胞分化,分析三种分化过程以及不同时期的SOX9与Ⅱ型胶原mRNA含量的变化,探讨SOX9在不同时空分布的表达规律及与Ⅱ型胶原的相关关系。方法:取4周龄昆明小鼠骨髓间充质细胞,体外培养得到MSCs并传达至第3代,对所获取的细胞进行流式细胞仪鉴定细胞表型确定为干细胞,通过流式细胞仪对干细胞进行细胞周期检测确定细胞增殖能力属于正常范围确定细胞数量,共分三组每组设三个时间段,不进行诱导的细胞作为对照组。通过成骨、成软骨、成脂肪三种诱导培养液对三组细胞进行诱导,分别在3天、7天、14天后收集提取细胞的总RNA,通过RT-PCR进行SOX9与Ⅱ型胶原的mRNA定量检测,同时对诱导后的细胞进行染色、免疫荧光染色,观察其分化状态及相关统计分析。结果:第三代BMSCs生长良好,流式细胞仪鉴定细胞表型证实为干细胞,对诱导后细胞进行染色、免疫荧光染色结果证实细胞分化为骨、软骨、脂肪细胞;经RT-PCR检测,在三组诱导分化细胞中SOX9mRNA含量由高到低分别是成软骨、成骨、成脂肪,Ⅱ型胶原mRNA含量由高到低分别是成软骨、成脂肪、成骨。在成软骨分化中SOX9在3天、7天是不断升高的,14天呈下降趋势。Ⅱ型胶原在3天、7天、14天都是逐渐升高的。在成骨分化中SOX9mRNA含量随着时间推移而增加,而Ⅱ型胶原则随着时间推移而不断降低,两组及各时间点表达含量相比较具有统计学意义(P<0.05)。在成脂肪分化中SOX9mRNA表达与对照组比较没有统计学差异(p>0.05);而Ⅱ型胶原的表达没有规律可循,时间点的延伸及检测未观察到。结论:提示SOX9在软骨分化中作用优于成骨、成脂肪组,且软骨分化中SOX9与Ⅱ型胶原存在相关性,可能在软骨分化的早期Ⅱ型胶原随着SOX9的变化而变化;软骨分化和成骨分化过程中SOX9与Ⅱ型胶原都有表达,软骨分化中两者表达逐渐增加、成骨分化中两者表达逐渐减少
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