60Coγ射线对大鼠腮腺成纤维细胞MRN复合体各亚基蛋白表达影响的初步观察

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【目的】观察大鼠腮腺成纤维细胞在不同剂量60C0γ射线照射下MRN复合体各亚基蛋白的表达变化,为进一步研究唾液腺上皮细胞放射敏感性提供实验基础。【方法】选取出生2天内的Wistar乳鼠,断颈处死后,置于75%酒精浸泡5min,在无菌条件下摘取乳鼠腮腺,分离腮腺包膜,用组织块培养法在H-DMEM培养基中(培养基含10%FBS)进行腮腺成纤维细胞原代培养。经波形蛋白和角蛋白免疫组化检测确定为种子细胞后,传代培养2-3代,再予以60Coγ射线0.5Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy放射剂量照射细胞,用免疫组化法检测MRN复合体各亚单位的瞬时蛋白表达变化,γ-H2AX免疫荧光技术检测不同照射剂量下DSBS损伤情况。【结果】1.经波形蛋白和角蛋白免疫组化检测鉴定,并结合取材部位确定所培养的细胞为腮腺成纤维细胞。2.通过免疫组化得出,在0-10Gy放射剂量照射下,MRN复合体各亚单位在腮腺成纤维细胞中的表达逐步增高,在10Gy时表达量达到峰值;rad50在1Gy和2Gy以及nbs1在0.5Gy和1Gy蛋白表达两两比较,差异无统计学意义(P>0.05),其余各组两两比较差异均有统计学意义(P≤0.05). rad50in1Gy and2Gy and nbs11Gy protein expression in0.5Gy and pairwisecomparison, the difference was not statistically significant (P>0.05), theremaining two groups were statistically significant differences (P≤0.05).3.通过免疫荧光染色观察,γ-H2AX焦点定位于细胞核中,成纤维细胞中4Gy、6Gy、8Gy、10Gy组与0Gy组相比表达增多,差异有统计学意义(P<0.05),其中10Gy剂量照射后成纤维细胞中γ-H2AX焦点数量明显多于其他放射剂量组(P<0.05),其余各组细胞放射组与0Gy组成纤维细胞中的焦点数两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。The remaining cellsradiology group0Gy the number of fibroblasts focus pairwise comparisons, thedifferences were statistically significant (P <0.05).【结论】1.本实验成功培养了腮腺成纤维细胞,为后续实验打下基础。2.腮腺成纤维细胞MRN复合体各亚基蛋白表达变化及DSB损伤程度均与放射剂量呈正相关。提示MRN复合体可能参与了腮腺成纤维细胞DSB损伤修复。
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