柽柳黄酮的提取纯化、测定方法及生物活性研究

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本文选新疆多花柽柳Tamarix hohenackeri为原料,以新疆多花柽柳叶中的总黄酮为研究对象,研究了多花柽柳黄酮类化合物的提取工艺与分离纯化工艺、对比并建立了三种测定方法,并对其抗氧化活性与抑菌活性进行了初步的基础研究,为多花柽柳黄酮今后的应用提供了实验基础。研究结果如下:(1)考察了不同提取方法对多花柽柳叶中的总黄酮提取率的影响。分别通过超声-微波协同萃取法、微波辅助提取法、超声波提取法、快速溶剂萃取法对多花柽柳中的黄酮类化合物进行了提取,并利用响应面设计法优化了超声-微波协同萃取法与快速溶剂萃取法提取黄酮类化合物的工艺。结果显示,快速溶剂萃取法提取黄酮的提取率最高。快速溶剂萃取法提取的最佳工艺参数为:乙醇浓度75%、提取温度80℃、循环次数为5次、提取时间5min,在此最优条件下的提取率为40.78mg/g。(2)筛选出多花柽柳叶总黄酮的最优纯化工艺。多花柽柳叶中黄酮类化合物的纯化选择D101树脂,最优纯化条件为样品溶液浓度0.2mg/mL,pH=1,流速为1mL/min。验证实验结果显示,在最佳条件进行纯化时平均纯度为75.04%。(3)本研究通过建立并比较三种用紫外分光光度法测定多花柽柳总黄酮的方法,并且尝试用分子荧光光度法测定多花柽柳叶黄酮类化合物。结果显示,三波长法操作简便、快速,并且误差较小,比较适合用于多花柽柳叶总黄酮的测定。(4)采用化学方法对多花柽柳叶总黄酮进行了体外抗氧化活性的测定,与Vc进行了对比,并通过滤纸圆片扩散法进行了抑菌实验且分别讨论了温度与培养基pH对抑菌效果的影响。实验结果显示,多花柽柳叶黄酮具有一定的抗氧化活性。多花柽柳叶黄酮的抗氧化活性略低于Vc,并在一定的浓度范围以内抗氧化活性与样品浓度成正比关系。多花柽柳叶黄酮对枯草芽孢杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、白色黏菌以及大肠杆菌具有较明显的抑制作用;当温度为70℃,培养基pH为5时,多花柽柳叶黄酮的抑菌活性最高。
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