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背景肺癌是威胁人类健康的重大疾病,是目前发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,而中国已成为世界上肺癌最多的国家。肺癌尽管采用多种治疗方法,如手术切除术、放化疗、免疫治疗、分子靶向以及生物治疗等,但是预后很差,5年生存率低于15%。顺铂作为常用的化疗药物,在肺癌的治疗中广泛应用,但顺铂抗肿瘤选择性差和毒副作用,且用药后容易出现耐药现象,影响了其抗肿瘤效果,限制了在临床上的应用。紫草素主要来源于中药紫草,目前对其研究主要集中在抗肿瘤作用方面,研究发现紫草素抑制肿瘤细胞生长可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥作用,另有研究证实紫草素可以下调A549细胞中intergrinβ1表达从而抑制细胞粘附、侵袭和转移。目的本实验以非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,观察左旋紫草素与顺铂联合使用对A549细胞的抑制作用,探讨左旋紫草素与顺铂联用对A549细胞抑制的作用机制,为临床应用左旋紫草素提供实验依据。方法采用MTT法筛选左旋紫草素与顺铂联用的最佳浓度,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,RT-PCR检测cyclin D1、PCNA、Rb和p16的mRNA表达变化,免疫荧光技术检测cyclin D1、PCNA、Rb和p16的蛋白表达变化,Western Blot检测XIAP和Survivin蛋白表达情况。结果(1)MTT法检测发现,两药联用组显示出更明显的抑制效应,其中左旋紫草素+5umol/L顺铂组72h时表现出最强的抑制效应,抑制率为88.3%。(2)流式细胞仪检测细胞凋亡率显示,联合用药能有效诱导肺癌A549细胞凋亡,其凋亡率显著高于对照组、单用组。(3)流式细胞仪检测细胞周期结果表明,两药联用组明显增加细胞在G0/G1期的比率,降低S期比率,而对G2/M期无明显影响(P<0.05)。(4) RT-PCR检测结果表明,两药联用组中cyclin D1, PCNA,和Rb的nRNA的表达量明显降低,而p16mRNA表达量明显增加,(5)免疫荧光技术分析发现,两药联合组中cyclinD1、PCNA、和Rb蛋白表达明显降低,而p16蛋白表达明显增加(P<0.05)。(6) Western Blot检测结果表明联用组可以明显下调XIAP和Survivin蛋白表达(P<0.05)。结论左旋紫草素可以抑制肺癌A549细胞增殖,左旋紫草素和顺铂联用可以明显的抑制肺癌A549细胞增殖、增强诱导凋亡作用,其作用机制可能是：1、通过降低细胞cyclin D1、Rb、PCNA和增加p16的mRNA和蛋白表达,降低Rb磷酸化失活,阻止细胞进入S期,抑制细胞增殖；2、通过下调XIAP和Survivin的蛋白表达,促进细胞凋亡。