目的 分离纯化类风湿性关节炎(RA)不同证型患者及正常人外周血CD4~+T淋巴细胞,提取细胞总RNA,利用高通量的全基因组芯片对其进行检测,探索RA患者寒热证候之间、RA患者与正常对照之间差异基因表达的微观基础。 研究对象和方法 研究思路:随机选取符合纳入标准的RA女性患者33例,参照相应标准进行寒、热证候辨别。取患者晨起空腹静脉血,利用淋巴细胞分离液,分离纯化CD4~+T淋巴细胞,提取细胞的总RNA,与全基因组芯片进行杂交并检测。检测结果采用t检验、方差分析等方法作统计分析,找出寒热证候之间、正常人与患者之间差异表达的基因,并对筛选出的差异基因作聚类分析,对结果作实时PCR检测验证。 1 研究对象 1.1病例收集 2004年1月至2005年1月,随机选取项目合作单位(中国中医科学院西苑医院、北京中日友好医院)门诊及风湿科住院女性患者33例,年龄20～60岁。纳入病例中寒证患者为21例,热证患者为12例。 正常对照组取自同期中国中医科学院西苑医院门诊体检女性,计12例,年龄20～40岁,正常对照组依据体检结果排除了感染、炎症等影响因素。 1.2病例纳入标准 疾病诊断、病情进展分类标准:参照1987年美国风湿病学会(ARA)修订的诊断标准拟定。 证候诊断标准:参照1993年卫生部《中药新药治疗痹病的临床研究指导原则》、1994年国家中医药管理局发布的《中医病证诊断疗效标准·旭痹的诊断依据、证候分类、疗效评定》、1997年中华人民共和国国家标准《中医临床诊疗术语证候部分》和1988年全国中西医结合风湿类疾病学术会议拟订的诊断标准。 寒、热证候诊断标准:寒证:①关节冷痛重着,屈伸不利;②关节拘急,局部畏寒,皮色不红;③舌胖,质淡,苔白;脉弦紧或弦缓。热证:①关节红、肿、