【摘 要】
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土壤盐碱化是影响作物生长、导致作物减产的主要非生物胁迫之一,通过基因工程手段选育耐盐作物新种质是利用和改良盐碱地的有效措施。本研究在盐胁迫下种子萌发期蛋白质组学
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土壤盐碱化是影响作物生长、导致作物减产的主要非生物胁迫之一,通过基因工程手段选育耐盐作物新种质是利用和改良盐碱地的有效措施。本研究在盐胁迫下种子萌发期蛋白质组学数据中筛选出上调表达蛋白Tau与DHAR类谷胱甘肽转移酶(Glutsthione-S-transferases,GSTs)RcGST 与 RcDHAR,以通蓖5 号为材料分析苗期盐胁迫下表达特性;克隆RcGST与RcDHAR,通过根癌农杆菌介导转化拟南芥,发根农杆菌介导转化蓖麻毛状根,研究RcGST与RcDHAR功能,为研究RcGST与RcDHAR响应蓖麻盐胁迫、培育耐盐高产蓖麻新种质奠定基础。主要研究结果如下:利用qRT-PCR分析RcGST与RcDHAR盐胁下蓖麻苗期表达特性,发现二者在蓖麻根、茎、叶均有表达,表达受盐胁迫影响且具有组织表达差异性。盐胁迫下RcGST在蓖麻叶中表达量最高,茎、根次之;盐胁迫下RcDHAR在根、茎中表达量较高,在叶中表达量较低。设计特异性引物克隆Tau与DHAR类GST基因,分别命名为RcG与RcDHAR,RcGSTORF为672 bp,编码223个氨基酸残基,与巴西橡胶树等7种植物GST氨基酸同源性在70%以上;RcDHAR ORF为552 bp,编码183个氨基酸残基,与麻风树等7种植物DHAR氨基酸同源性在83%以上。通过根癌农杆菌介导RcGST与RcDHAR转化拟南芥,发根农杆菌介导RcGST与RcDHAR转化蓖麻毛状根。对各株系转基因拟南芥不同生长发育期耐盐表型鉴定发现,在种子萌发阶段,盐胁迫下转基因拟南芥种子萌发率显著高于野生型;在苗期,幼苗初生根长及生长状态显著优于野生型。生理指标测定结果表明,盐胁迫下各株系转基因拟南芥与蓖麻毛状根电导率(Rate of electrolyte,REL)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量显著低于野生型,超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性显著高于野生型;盐胁迫下各株系转基因拟南芥与蓖麻毛状根氧化型谷胱甘肽(Glutathione disulphide,GSSG)含量显著高于野生型,还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量显著低于野生型。转RcDH4R拟南芥与蓖麻毛状根AsA含量分别提高1.8、1.5倍。该研究为蓖麻耐盐分子育种提供理论参考。
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