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Jessen等人就证实GABA不仅存在于中枢神经系统,还广泛的分布在胃肠道等外周神经系统中[1]。有研究表明GABA对大鼠,豚鼠,猫和狗等动物消化道平滑肌自主收缩活动产生影响,其作用效果因动物的种类和胃肠的部位不同而不同。产生这种现象的原因可能是GABA的受体分布不同或对非肾上腺能非胆碱能神经作用的缘故,但确切的原因还不十分明确。但GABA在小鼠回肠内的分布及对小鼠平滑肌自主收缩的作用影响的研究尚未见报道。本实验运用免疫组织化学的方法检查了GABA在小鼠回肠的分布;以小鼠回肠肌条收缩幅度变化为指标,观察了GABA对小鼠回肠肌条自主收缩的抑制作用以及一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NNA,可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)抑制剂ODQ,β-受体抑制剂普萘洛尔(Propranolol)对GABA抑制作用的影响。初步讨论了GABA对小鼠回肠自主收缩作用时与NO,cGMP和β-受体的相互关系。
实验结果:
1.小鼠回肠粘膜层及粘摸下层也有GABA阳性细胞和纤维分布;平滑肌肌层可见GABA免疫反应阳性。
2.GABA(1×10-6~1×10-3mol/L)抑制了小鼠回肠平滑肌自主收缩幅度。各浓度GABA的幅度与对照组均有统计学差异(P<0.05,n=10)。其中1×10-6mol/LGABA幅度抑制百分率达(34.7±7.4)%。
3.GABAA受体的抑制剂picrotoxin(3×10-5mol/L)孵育标本后,各浓度的GABA的抑制作用没有改变(P>0.05,n=7)。
4.NOS抑制剂L-NNA(1×10-5mol/L孵育标本后,再加入GABA(1×10-6mol/L)后,幅度抑制百分率为(15.9±3.8)%,比单独同浓度的GABA的抑制百分率下降,差别有统计学意义(P<0.05,n=6)。
5.预先用可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)抑制剂ODQ(1×10-6mol/L)孵育小鼠回肠肌条15min后,再加入GABA(1×10-6mol/L),其收缩幅度为(0.34±0.05)g与未加药前自主收缩(0.35±0.05)g幅度相比,没有明显差别(p>0.05,n=5)。与单独加入1×10-6mol/LGABA相比,其抑制百分率由(33.2±7.3)%下降到(4.8±1.3)%,两者相比差异有显著统计学意义(P<0.01,n=5)。
6.用L-Arg(5×10-7mol/L)孵育标本15min,1×10-6mol/LGABA幅度抑制百分率仅为(7.1±1.8)%,与单独同浓度的GABA幅度抑制百分率(35.1±7.3)%相比,差异有统计学意义(P<0.01,n=6)。1×10-3mol/LGABA在加入L-Arg后幅度抑制百分率与单独同浓度的GABA幅度抑制百分率相比,差异没有统计学意义(P>0.05,n=6)。
7.用propranolol(3×10-6mol/L)孵育标本15min,再加入1×10-6mol/LGABA,其幅度抑制百分率为(14.6±2.6)%,与单独同浓度的GABA幅度抑制百分率(34.4±7.2)%相比,幅度抑制百分率降低,其差别具有统计学意义(P≤0.01,n=6)。加入propranolol后使1×10-3mol/LGABA的幅度抑制百分率比单独同浓度的GABA的幅度抑制百分率降低,其差异也有统计学意义(p<0.05,n=6)。
结论:
小鼠回肠有GABA能纤维分布。GABA对小鼠回肠自主收缩主要起抑制作用,这种抑制作用与GABAA受体所介导的Cl-通道无关,而受NO和β-肾上腺素能受体活动的影响。