铕荧光探针及其在药物和DNA分析中的应用

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铕(Eu)和铽(Tb)为代表的稀土配合物以其窄的发射光谱、较大的Stokes位移、长荧光寿命、荧光稳定等许多优越特性,已成为目前分析化学领域中十分活跃的研究课题。本研究采用时间分辨荧光法,以稀土铕(Ⅲ)作为荧光探针,建立了一种简单而灵敏的测定吡哌酸(PPA)含量的新方法。吡哌酸和铕(Ⅲ)配合后,作为配体的吡哌酸吸收紫外光并将能量传递给铕,然后发射铕离子的特征荧光。详细研究了Eu3+-PPA配合物体系的荧光光谱特征及实验条件对体系荧光强度的影响,配合物荧光体系的最大激发和发射波长分别为274 nm和616 nm,在pH 8.2的Tris-HCl缓冲溶液中,加入适量阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)后,体系荧光强度大大增强,吡哌酸溶液在5.00×10-8~5.00×10-6 mol/L浓度范围内与荧光强度呈良好的线性关系,方法的检出限为2×10-8 mol/L,测定精度RSD为0.6%(2.00×10-6 mol/L, n=11)。该方法可用于吡哌酸药片含量及尿液中痕量吡哌酸的测定,药片测定结果与药典方法基本一致,尿样中加标回收率令人满意。脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, DNA)的天然荧光很微弱,使得直接利用其荧光进行研究受到很大限制。吡哌酸与铕(Ⅲ)反应生成的配合物发射Eu3+的特征荧光,而DNA的加入又可使其荧光强度大大增强。本研究采用时间分辨荧光法,以Eu3+-PPA作为荧光探针,使其与鲱鱼精DNA相互作用,实验发现荧光强度随鲱鱼精DNA的浓度的增加而增强,可以定量检测鲱鱼精DNA的含量。鲱鱼精DNA的浓度在0.1~6.0mg/L范围内与荧光强度呈良好的线性关系,方法的检出限为0.03 mg/L,对浓度为4.0mg/L的鲱鱼精DNA平行测定11次的相对标准偏差为0.3%,已成功用于合成样品中鲱鱼精DNA的测定。
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