合萌(Aeschynomene indica L.)是豆科蝶形花亚科合萌属植物,味甘、苦,性微寒,归肺、胃经,具有清热利湿、利尿、通乳等功效。研究表明,合萌提取物具有抗氧化、抑菌、抗炎及抗过敏等药理活性,但目前对其有效活性部位的研究极少。此外,现代药理学研究表明,黄酮类化合物是天然植物中主要的活性成分,具有抗氧化、抗炎等生物活性,但目前鲜有关于合萌黄酮类化合物研究的文献报道,影响了合萌的有效利用。因此本论文以合萌为研究对象,通过对合萌黄酮类化合物提取、分离纯化、结构鉴定、多指标成分含量测定及其生物活性的研究,为合萌及其活性成分的有效利用及综合开发提供理论基础。主要研究内容和结论如下:1.合萌黄酮类化合物提取工艺研究采用单因素试验结合响应面分析法优化合萌黄酮类化合物的提取工艺,并结合实际情况确定最佳提取工艺为:25倍量65%乙醇90℃提取两次,每次60 min,在此优化条件下,总黄酮得率为4.08mg/g。2.合萌黄酮类化合物的分离纯化及结构鉴定本实验首次对合萌黄酮类成分进行系统的研究,采用有机溶剂提取、聚酰胺柱层析、硅胶柱层析、凝胶柱层析及ODS反相柱色谱,并结合重结晶的方法从合萌中分离出四种黄酮单体,经理化性质、TLC、MS及NMR分析鉴定,确定化合物分别为槲皮素、萹蓄苷、异槲皮苷、芦丁。3.HPLC法同时测定合萌中芦丁、异槲皮苷、萹蓄苷、槲皮素含量建立了HPLC法同时测定合萌粗提物和总黄酮冻干粉中芦丁、异槲皮苷、萹蓄苷、槲皮素四种指标性成分的含量,结果表明纯化前后黄酮成分基本一致,且纯化后总黄酮中四种黄酮单体成分均得到了富集,其中萹蓄苷纯化后达54.312 mg/g。该方法快速、简单且重复性好,为药材的内在质量控制提供了一定的参考依据,同时为后续药效学研究奠定理论基础。4.合萌黄酮类化合物抗氧化活性研究通过四种体外抗氧化试验研究了合萌粗提物、总黄酮以及四种黄酮单体的抗氧化作用。研究表明,在25~200μg/mL浓度范围内,合萌总黄酮的抗氧化活性高于合萌粗提物,说明合萌中黄酮类化合物抗氧化活性较高,且四种黄酮单体中槲皮素的活性最高,推测与化合物的结构有关,因槲皮素B环的邻苯二酚结构、2,3位的双键及3位和5位上羟基的存在是其发挥抗氧化活性的关键,而芦丁、异槲皮苷和萹蓄苷中3-OH被糖基化,从而使其抗氧化活性大大减弱。5.合萌黄酮类化合物抗炎活性研究通过cck-8法研究了合萌黄酮类化合物对巨噬细胞活性的影响,结果表明在样品浓度范围内,合萌粗提物、总黄酮及四种单体化合物均对巨噬细胞无明显的毒副作用。选取适宜的样品浓度,以LPS刺激巨噬细胞建立炎症模型,探讨合萌黄酮类化合物对巨噬细胞分泌NO的影响,结果表明在50~200μg/mL浓度范围内,合萌总黄酮对巨噬细胞分泌NO的抑制作用较粗提物强,表明合萌中黄酮类化合物抗炎活性较高;在10~40μmol/L浓度范围内,四个单体化合物中槲皮素抗炎活性最高,萹蓄苷抗炎活性相对较弱,而芦丁与异槲皮苷没有抗炎活性,这可能是由于糖苷取代了羟基,从而降低了游离羟基与位点的结合,使抗炎活性大大减弱甚至缺失。