红细胞生成素(erythropoietin EPO)是一种刺激骨髓造血的糖蛋白类激素，目前主要用于难治性贫血。近年来的研究发现EPO受体(EPOR)在肾内也广泛存在，EPO对肾脏也有明显的保护作用，可明显减轻急慢性肾脏损伤、延缓肾脏纤维化进程。 巨噬细胞几乎参与了急慢性肾损伤的各个环节，肾损伤局部浸润的大量巨噬细胞被激活后释放活性氧(ROS)、前炎症因子(TNF-α、IL-1 β、TGF-β1)和趋化因子等多种物质，介导多种细胞坏死或凋亡，促进小球及间质的损伤；促进细胞外基质(ECM)的生成，导致间质纤维化；同时趋化更多巨噬细胞黏附和浸润；进一步加重了肾损伤。 近年来有研究发现巨噬细胞表面也有EPOR的表达，EPO抑制炎症反应的同时也可以减少肾损伤局部巨噬细胞的浸润；提示EPO可能通过调节巨噬细胞的趋化激活过程，减轻氧化应激和炎症反应从而减缓肾脏病的发展。以往的研究大都以动物模型为依托探讨EPO对整个肾脏炎症反应和氧化应激状态的影响；对EPO影响巨噬细胞的相关研究仅仅限于少量动物实验，相关的体外研究还尚属空白，因此本实验的重点放在了体外实验中EPO对LPS激活的RAW264.7细胞炎症反应和氧化应激的影响上。 研究目的: 本研究探讨EPO预孵育的RAW264.7细胞经LPS刺激后，炎症因子TNF-α、IL-1β及TGF-β1 mRNA表达、蛋白分泌以及细胞内ROS含量的变化情况，以及EPO预孵育浓度和时间的影响，并探讨上述作用的可能机制。 材料与方法: RAW264.7细胞，予含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基，置37℃，5％CO2的恒温培养箱内培养。取对数生长期的RAW264.7细胞接种入六孔板，分别检测不同浓度梯度和不同时间梯度LPS刺激RAW264.7细胞后TNF-α、IL-1β、TGF-β1的mRNA表达水平，结合文献选出合适的LPS刺激浓度和检测时间。EPO对RAW264.7细胞炎症反应和氧化应激影响的实验，根据EPO预孵育时间不同分为Ⅰ和Ⅱ两个大组，Ⅰ组EPO预孵育2小时，Ⅱ组预孵育4小时。每组分为：空白对照组(正常培养基孵育)、LPS处理组(0.5 μg／ml LPS刺激8小时)和EPO处理组(EPO预孵育后0.5 μg／ml LPS刺激8小时)，EPO处理组又分为A、B、C、D四组，EPO浓度分别为5U／ml、10U／ml、50U／ml、100U／ml。用RT-PCR和ELISA法分别检测前炎症因子TNF-α、IL-1β、TGF-β1的mRNA表达水平和蛋白表达水平，流式细胞仪检测反映细胞内的氧化应激水平的平均荧光强度。 结果: LPS刺激RAW264.7细胞后前炎症因子TNF-α、IL-1β的mRNA表达和蛋白水平以及TGF-β1的mRNA水平都明显升高(p<0.05)。EPO预孵育后，上述前炎症因子mRNA表达和蛋白水平较LPS刺激组都有明显下降(p<0.05)，而且EPO浓度越高，上述前炎症因子mRNA表达和蛋白水平越低；EPO顸孵育4小时与预孵育2小时相比细胞内的炎症因子的水平没有明显差别。EPO预孵育后，各组细胞内ROS含量的变化趋势与上述炎症因子类似。 结论: EPO可下调LPS刺激的RAW264.7细胞炎症因子。TNF-α、IL-1β、TGF-β1的mRNA和蛋白表达，降低胞内的ROS含量；上述作用与EPO的浓度呈正相关；提示EPO可剂量依赖性的抑制巨噬细胞的炎症反应和氧化应激。