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褪黑素是一种主要由松果体合成,参与调节机体免疫、代谢、昼夜节律等生理活动的神经内分泌激素。褪黑素在肿瘤的发生发展过程中起重要的免疫调控作用,但其对胃癌的肿瘤免疫调节作用及机制尚未明确。研究目的本研究旨在建立去松果体、胃荷瘤小鼠模型,通过流式细胞术、Real time RTPCR、Western Blot、免疫组织化学技术等技术手段,探讨褪黑素干预后,对胃荷瘤小鼠的免疫调控作用与机制。研究方法1.运用HE染色法、免疫组化技术检测胃荷瘤小鼠胃组织的病理变化。2.运用流式细胞术检测褪黑素干预下胃荷瘤小鼠脾细胞中CD4、CD8a、CD38、CD69、perforin、Granzyme B、CD26、CD278、I-A/I-E表达变化。3.运用CBA法检测褪黑素干预下胃荷瘤小鼠血浆中IFN-γ、TNF、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A含量变化。4.运用Real time PCR检测褪黑素干预下胃荷瘤小鼠胸腺、脾脏组织T细胞活化及MAPK信号通路相关分子Elk-1、JNK、LAT、NF-κB、p38 m RNA水平的变化。5.运用Western Blot检测褪黑素干预下胃荷瘤小鼠胸腺、脾、胃组织Elk-1、p-JNK、LAT、NF-κB、p38、ERK1/2蛋白的表达。6.运用免疫组化技术检测褪黑素干预下胃荷瘤小鼠脾脏组织p-JNK、LAT、NF-κB、p38、ERK1/2表达的变化。研究结果1.石蜡切片HE染色结果及免疫组化结果显示:去松果体、胃荷瘤小鼠模型构建成功。2.流式细胞术结果显示:10、20mg/kg剂量组小鼠脾细胞中CD4、CD26、CD69、CD278、I-A/I-E表达量均明显下调,10mg/kg剂量组小鼠脾细胞中CD38表达量下调,CD8a、Granzyme B表达量上调,20mg/kg剂量组小鼠脾细胞中CD38表达量上调,Granzyme B、perforin表达量下调,40mg/kg剂量组小鼠脾细胞中CD4、CD8a、CD26、CD38、Granzyme B、I-A/I-E、perforin表达量上调,CD69表达量下调。3.CBA结果显示:10mg/kg剂量组小鼠血浆中IFN-γ、TNF、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10含量下调,40mg/kg剂量组小鼠血浆中TNF、IL-6、IL-10含量上调。4.Real time PCR结果显示:在胸腺组织中,10mg/kg剂量组NF-κB mRNA表达量下调,20mg/kg剂量组Elk-1、JNK、NF-κB、p38m RNA表达量均上调。在脾脏组织中,10mg/kg剂量组Elk-1、LAT、p38 m RNA表达量上调。5.Western Blot结果显示:在胸腺组织中,10mg/kg剂量组p-JNK蛋白表达量上调,LAT、NF-κB、p38蛋白表达量下调,20mg/kg剂量组Elk-1、NF-κB蛋白的表达量上调,40mg/kg剂量组Elk-1、LAT、NF-κB、p38蛋白的表达量下调。在脾脏组织中,10mg/kg剂量组Elk-1、p38蛋白表达量下调,p-JNK、NF-κB蛋白表达量上调,20mg/kg剂量组p-JNK、LAT蛋白表达量上调,40mg/kg剂量组Elk-1蛋白表达量下调,LAT、NF-κB、p38蛋白表达量上调。在胃组织中,10mg/kg剂量组p-JNK蛋白表达量上调,20mg/kg剂量组p-JNK蛋白表达量下调,40mg/kg剂量组Elk-1蛋白表达量上调,p-JNK、LAT蛋白表达量下调。6.脾脏组织免疫组化结果显示:10mg/kg剂量组p38表达量下调、ERK1/2表达上调,20mg/kg剂量组p-JNK、LAT、ERK1/2表达上调,40mg/kg剂量组LAT表达下调。结论NF-κB、MAPK信号通路介导褪黑素对胃荷瘤小鼠T细胞的活化过程。