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背景:熊果酸(Ursolic acid,UA)是存在于天然植物中的一种三萜类化合物,具有镇静、抗炎、调血脂和抗菌等多种药理作用。有机阴离子转运多肽1B3(OATP1B3)属于溶质载体家族型转运体,其转录翻译受FXR、PXR、CAR、HNF-1α等核受体调控。课题组前期研究表明,UA可以增加OATP1B1的转运功能且能上调其mRNA和蛋白的表达,而转运体OATP1B3和OATP1B1有80%氨基酸同源性,且这两种转运体有很多相同的底物,那么UA是否也能改变OATP1B3表达从而影响其底物的摄取转运?作用机制如何呢?这值得我们深入探讨。目的:1、研究UA对转运体OATP1B3 mRNA及蛋白表达的影响。2、研究UA对核受体FXR介导OATP1B3调控通路的影响及其机制。方法:1、使用RT-qPCR和Western blot等实验技术,分别考察UA对OATP1B3、FXR、CAR、PXR和HNF-1αmRNA和蛋白表达的影响。2、采用LC-MS/MS法测定替米沙坦的浓度,探究在HepG2细胞中UA对OATP1B3转运功能的影响。3、运用双荧光素酶报告基因法,考察UA对FXR作用于OATP1B3启动子活性的影响。4、构建沉默FXR的HepG2细胞,考察UA对HepG2细胞中OATP1B3mRNA及蛋白表达的影响。结果:1、在HepG2细胞中,UA作用24h和48h后都能上调OATP1B3 mRNA和蛋白的表达。作用24h后,与对照组比较,OATP1B3 mRNA表达分别上调89.0%90.0%,112.7%和126.3%,OATP1B3蛋白表达分别上调42.0%,46.0%,64.3%和72.3%;作用48h后,OATP1B3 mRNA的表达分别上调107.3%,125.0%,164.7%和185.3%,OATP1B3蛋白表达分别上调44.5%,87.9%,106.4%和128.6%。在HepG2细胞中,UA在4μM、8μM、16μM和32μM下作用24h后上调替米沙坦的摄取,分别是空白对照组1.78、2.04、2.15及2.31倍,当作用48h时也能上调替米沙坦的摄取,分别是空白对照组1.71、2.16、2.22及2.49倍。2、在HepG2细胞中,系列浓度的UA作用24h后,UA对HNF-1α和CAR mRNA和蛋白的表达没有显著作用(P>0.05),UA对PXR和FXR mRNA和蛋白表达都有显著性差异(P<0.05),但是PXR的激动剂利福平(RIF)对OATP1B3的表达没有显著性差异;UA在4μM、8μM、16μM及32μM下干预HepG2细胞24h后,FXR mRNA的表达分别上调了64.7%、65.0%、69.7%及110.0%,阳性对照FXR的激动剂GW4064组上调了191.0%;FXR蛋白的表达分别上调了38.3%、42.7%、53.0%及72.7%,激动剂GW4064组的蛋白上调了107.0%,具有显著性差异(P<0.05),UA干预48h后,FXR mRNA的表达分别上调了161.0%、243.7%、272.3%及346.7%,激动剂GW4064组上调了375.0%,FXR蛋白的表达分别上调了45.3%、57.0%、63.3%及92.7%,激动剂GW4064组上调了116.3%,差异具有显著性(P<0.05)。3、双荧光素酶报告基因的结果显示:UA在4μM、8μM、16μM及32μM下对OATP1B3报告基因活性都有上调作用(P<0.05),诱导倍数分别为1.66、1.81、2.24及2.44倍,阳性对照组GW4064诱导倍数为3.28倍。4、在沉默FXR的HepG2细胞中,UA对OATP1B3 mRNA和蛋白的表达没有显著性影响,与shRNA-blank细胞相比,OATP1B3 mRNA的表达量分别减少了39.8%、43.1%及49.6%,阳性对照组GW4064减少了64.6%,OATP1B3蛋白的表达量分别减少了33.1%、34.7%及44.6%,阳性对照组GW4064减少了50.1%。结论:1、UA可以上调OATP1B3 mRNA和蛋白的表达。2、UA通过调节FXR间接调控OATP1B3的表达。3、UA可以增加OATP1B3的转运功能,其机制可能通过调控FXR-OATP1B3信号通路实现。