【摘 要】
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目的(1)培养转染所需兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)。(2)通过采用阳性脂质体pcDNA3.1(-)介导的转染到BMSCs方法,获得稳定转染的BMSCs细胞
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目的(1)培养转染所需兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)。(2)通过采用阳性脂质体pcDNA3.1(-)介导的转染到BMSCs方法,获得稳定转染的BMSCs细胞。(3)使用免疫组化、WesternBlot法检测pcDNA3.1-hBMP2在兔BMSCs中蛋白的表达情况。方法(1)贴壁法培养扩增所需BMSCs并从形态学、流式细胞仪测量表面标记物。(2)将已成功构建的pcDNA3.1-hBMP2重组质粒进行体外靶细胞转染并使用G418筛选稳定表达细胞。(3)通过免疫组化、WesternBlot法检测其在BMSCs中的蛋白表达。结果(1)经培养,扩增兔骨髓间充质干细胞,P2、P3可作为hBMP2转染的靶细胞。(2)用阳离子脂质体转染pcDNA3.1-hBMP2的MSCs经G418筛选后,经免疫组化、WesternBlot法检测,转染pcDNA3.1-hBMP2后的兔骨髓间充质干细胞内有大量hBMP2 mRNA的转录和相关蛋白的表达,而未转染的骨髓间充质干细胞未见阳性表达。结论(1)兔骨髓间充质干细胞可作为hBMP2转染的靶细胞。(2)本实验成功构建hBMP2真核表达质粒并在兔骨髓间充质干细胞中得到相关表达。(3)本研究为进一步研究BMP2基因转染MSCs的体外增殖并稳定表达和在动物试验中来加速牵张成骨新骨形成的实验奠定了基础。
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