前言 肺癌是呼吸系统最常见的恶性肿瘤之一,在我国许多地区恶性肿瘤的死亡率统计中肺癌占首位。侵袭和转移是肺癌的重要生物学特征之一,也是决定肺癌预后的重要关键因素。Racl是Rho家族中重要成员之一,与肿瘤的侵袭转移密切相关,但与肺癌的关系尚不清楚。本研究应用免疫组织化学S-P法及RT-PCR技术检测肺癌组织及癌旁组织中Racl的表达状况,探讨其表达与临床病理因素之间的关系。 方法 1.采用免疫组织化学S-P方法检测肺癌组织中Racl的表达。 所用非小细胞肺癌标本为中国医科大学第一附属医院2003年11月-2004年9月外科手术切除原发性肺癌80例,标本经10%中性福尔马林固定,石蜡包埋。另收集新鲜肺癌组织及癌旁正常肺组织标本30例,术后立即放人-70℃冰箱保存,用于RT—PCR,患者术前均未接受过放化疗。免疫组化染色方法采用链霉菌抗生物素过氧化物酶连接法。抗Racl鼠抗人单克隆IgG抗体购自美国Santa Crutz公司,TRIZOL总RNA提取试剂购自美国Invitrogen公司,SP染色试剂盒、DAB显色液为福州迈新公司产品。免疫组化染色操作按常规SP染色步骤进行。 以正常支气管粘膜上皮细胞染色为阳性对照,PBS缓冲液代替一抗为阴性对照。每张切片随机选取5个高倍视野,每高倍视野计数100个瘤细胞,无着色为(-),阳性细胞数≤25%为(+),26～75%为(++),≥76%为(+++)。Racl正常为不表达或弱表达,而在癌组织中出现表达增强。我们参考Horiuchi对卵巢癌中Rho GTP酶免疫组化检测的结果,将Racl胞浆表达(-)～(+)定义为表达正常,将(++)～(+++)定义为过度表达。