miR-338-5p靶向作用于TRAF3参与肾移植术后抗体介导的免疫排斥

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wenmin673594913
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:本课题旨在研究miR-338-5p在肾移植患者的表达特点,及其对BAFF信号的调控作用,进而探讨其在抗体介导的肾移植排斥中的作用及意义。方法:⑴采用共转染方法,利用双荧光素酶报告基因检测系统进行miR-338-5p的靶基因验证。⑵收集肾移植患者的血清(健康志愿者为对照),应用real-timePCR法检测患者血清中miR-338-5p的表达差异;ELISA法检测血清sBAFF的表达量;液相芯片技术检测血清中抗HLA-Ⅰ类抗体、抗HLA-Ⅱ类抗体、抗MICA抗体滴度。从而分析miR-338-5p、sBAFF、抗体间的相关性。⑶在体外试验中,采用以抗IgM抗体和/或重组人BAFF蛋白刺激的CD20+扁桃体B细胞培养体系,观察miR-338-5p激动剂/拮抗剂、及TRAF3siRNA干扰作用下,B细胞分泌IgG、IL-10的水平,来分析miR-338-5p对B细胞生物学功能的影响。采用SPSS17.0统计软件包进行分析。两个独立样本均数间的比较采用双侧t检验;配对样本均数间的比较采用配对样本t检验;相关性分析采用Spearman法及Pearson法;P<0.05被认为具有统计学意义。结果:⑴双荧光素酶报告基因检测系统验证结果表明TRAF3和NF-κB1均是miR-338-5p的靶分子,TRAF3被负向调控,NF-κB1被正向调控;⑵与健康对照组比较,肾移植受者血清miR-338-5p水平显著下降(P<0.001)、血清sBAFF水平显著增高(P<0.01)。移植术后1年内者血清miR-338-5p水平显著低于移植术后1年以上者(P<0.01);移植术后3年内者血清miR-338-5p水平显著低于移植术后3年以上者(P<0.01);⑶对全部研究对象进行统计分析显示,血清miR-338-5p与sBAFF、抗HLA-Ⅱ抗体均呈显著负相关,相关系数分别为-0.51(P<0.001)、-0.322(P<0.05);术后3年内者,血清miR-338-5p与抗HLA-Ⅱ抗体、抗MICA抗体均呈显著负相关,相关系数分别为-0.423(P<0.05)、-0.411(P<0.05);术后3年以上者,血清miR-338-5p与抗MICA抗体、抗HLA&MICA抗体均呈显著正相关,相关系数分别为0.486(P<0.05)、0.578(P<0.01);⑷CD20+B淋巴细胞的体外培养试验结果显示,存在BAFF信号共同作用时,miR-338-5p经靶向作用于TRAF3增强了BAFF信号,使得B细胞分泌IgG显著增多(132±5.29ng/mlvs155±5.57ng/ml,P<0.05)。结论:miR-338-5p经靶向作用于TRAF3,间接调控BAFF信号,参与肾移植术后免疫反应过程,影响移植肾长期存活。
其他文献
目的:  探讨细胞蜡块在非小细胞肺癌患者中病理诊断及分子检测中的应用价值及临床意义。  方法:  收集2014年1月~2017年6月九江市第一人民医院收治30例确诊非小细胞肺癌(未
目的:①采用不同剂量的弓形虫速殖子经腹腔接种孕中期小鼠,建立弓形虫急性感染孕鼠的模型。②利用弓形虫感染孕鼠模型,测定胎盘分泌的生乳素(HPL)、乙酰胆碱(Ach)、表皮生长