研究背景在呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征（Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS）等危重患者的救治中,机械通气是必不可少的治疗措施;但机械通气有时也会导致急性肺损伤,即呼吸机相关性肺损伤（ventilator-induced lung injury,VILI）,严重影响患者的预后。深入探讨VILI发生机制、寻求VILI防治措施,具有重要的临床意义。研究表明,炎症反应导致的生物伤在VILI发生过程中具有重要作用,不合适的机械牵张作用于肺效应细胞,诱发炎性介质大量释放、炎性细胞浸润,最终可引起弥漫性的肺泡损害、肺水肿。调控炎症反应是预防急性肺生物伤的关键,是防治VILI的主要内容。肺泡巨噬细胞（alveolar macrophages,AMs）占肺部巨噬细胞总数的90%以上,是肺脏受到异常刺激后首先被激活并启动炎症反应的细胞。既往研究表明,机械牵张可快速激活肺泡巨噬细胞,肺泡巨噬细胞是肺脏主要的炎性介质来源,炎症早期可合成并释放炎性因子、粘附因子、趋化因子、危险信号分子、补体等多种炎性介质;肺泡巨噬细胞的预先消耗可减少促炎因子的合成分泌、减少中性粒细胞等炎症细胞募集,显著减轻大鼠的VILI。微小RNA（microRNA,miRNA）是一类功能强大的内源性非编码单链RNA,长度约为18-25个碱基,进化上保守,且在不同物种中具有高度同源性。miRNA可通过与特异性靶基因mRNA的3’非编码区（3’Untranslated Region,3’UTR）相结合,促进靶基因的降解或者阻止靶基因的翻译,在转录后水平调控基因表达,在细胞分化、迁移、凋亡和疾病发生等众多方面均发挥重要作用。目前miRNA的相关研究已逐渐从实验室走向临床,越来越多的miRNA已作为疾病诊断的生物标志物或治疗靶点。miR-145是一种抑癌基因,可靶向负调控YES、FSCN1、STAT1等多种致癌基因,抑制肿瘤的发生发展。近年来有研究表明,miR-145还在某些炎症性疾病中发挥一定的抗炎作用,比如:miR-145高表达可减轻血管平滑肌细胞炎性反应进而减少动脉粥样硬化的发生率,可抑制心肌细胞缺氧相关炎性反应,可减轻银屑病患者的皮肤炎症,可减轻LPS导致的败血症并提高败血症小鼠的总体存活率等。有研究发现小鼠发生VILI时伴有miR-145表达下降,但miR-145能否参与VILI的炎症调控和可能的作用机制未见相关报道,本实验将在NR8383细胞（大鼠肺泡巨噬细胞）机械牵张模型和大鼠VILI动物模型上开展此项研究。程序性细胞坏死因子4（programmed cell death 4,PDCD4）最早被发现于1995年,它可通过真核细胞启动因子4A（eukaryotic initiation factor 4A,eIF4A）依赖途径和非eIF4A依赖途径调控靶基因转录,参与肿瘤、炎症等多种疾病的发病过程。在诸多炎症性疾病模型中,PDCD4均发挥促炎作用,比如:PDCD4基因缺失可显著降低小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎模型中脊髓的炎症反应;在脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导杀伤模型中,pdcd4-/-小鼠炎性损伤明显减轻,存活率远高于野生型小鼠;PDCD4敲除可减轻高脂导致的血管内皮炎症反应,减少动脉粥样硬化斑块面积。但也有相反报道,如在LPS/D-半乳糖苷诱导的小鼠急性肝损伤模型和葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性结肠炎模型中,pdcd4-/-小鼠较野生型小鼠炎症反应更为严重。PDCD4在肺组织中有较高表达,其能否参与调控机械通气导致的肺部炎症反应,目前尚无相关报道。TargetScan等miRNA靶基因信息预测软件及既往相关研究均提示miR-145可靶向调控PDCD4,与我们的预实验结果相符。我们推测miR-145有可能会通过调控PDCD4的表达对机械牵张导致的肺组织炎症反应产生影响。为验证该推测,我们将以NR8383细胞（大鼠肺泡巨噬细胞）机械牵张模型、大鼠VILI模型为研究对象,采用miRNA mimic转染、miRNA inhibitor转染、siRNA转染等基因调节技术,使用RT-qPCR、ELISA、Western blot、双荧光素酶报告基因实验、转录因子酶联免疫分析、HE染色等多种检测手段,多层面探讨miR-145调控PDCD4对呼吸机相关性肺损伤的影响。研究目的1.探讨机械牵张对肺泡巨噬细胞及肺组织中miR-145表达的影响;2.探讨miR-145对机械牵张所致肺泡巨噬细胞炎性反应和呼吸机相关性肺损伤的影响;3.探讨PDCD4对机械牵张所致肺泡巨噬细胞炎性反应的影响及相关机制;4.明确miR-145对PDCD4的靶向调控关系,探讨miR-145减轻呼吸机相关性肺损伤的机制。研究方法第一部分:MiR-145在NR8383细胞机械牵张模型中的表达及炎症调控作用1.机械牵张对NR8383细胞炎性反应和miR-145表达的影响1.1 NR8383细胞机械牵张NR8383细胞经复苏、培养、传代后,取处于对数生长期的细胞接种到预先铺有胶原的Flexcell应力加载系统的6孔板内,细胞密度为1*105/cm2。分组如下:（1）C组:对照组,不加载机械牵张;（2）MS组:机械牵张（mechanical stretch,MS）组,加载机械牵张,牵张强度为20%,频率0.5HZ,牵张松弛比为1:1,牵张时间为4h。1.2 ELISA检测各组上清液中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量1.3 RT-qPCR检测各组细胞miR-145表达量2.MiR-145对机械牵张所致NR8383细胞炎性反应的调控作用2.1 细胞转染 miR-145 mimic、miR-145 inhibitor 及其阴性对照（negative control,NC）取对数生长期的NR8383细胞,分组及处理如下:（1）C组,对照组,不进行转染;（2）Mimic组,转染miR-145 mimic;（3）Mimic-NC组,转染miR-145 mimic-NC;（4）Inhibitor 组,转染 miR-145 inhibitor;（5）Inhibitor-NC 组,转染miR-145 inhibitor-NC。使用lipo2000转染试剂进行转染,转染后6h更换为完全培养基,继续培养48h。2.2 RT-qPCR检测各组细胞miR-145含量,验证转染效果。2.3机械牵张细胞转染成功后,根据分组计划将细胞接种到预先铺有胶原的Flexcell应力加载系统的6孔板内,细胞密度约1*105/cm2。分组及处理如下:（1）C组,为对照组,未转染的细胞,不加载机械牵张;（2）MS组,对未转染的细胞加载机械牵张,参数同前;（3）Mimic+MS组,对转染miR-145 mimic的细胞加载机械牵张,参数同MS组;（4）Mimic-NC+MS组,对转染miR-145 mimic-NC的细胞加载机械牵张,参数同MS组;（5）Inhibitor+MS组:对转染miR-145 inhibitor的细胞加载机械牵张,参数同MS组;（6）Inhibitor-NC+MS组:对转染miR-145 inhibitor-NC的细胞加载机械牵张,参数同MS组。2.4检测炎性因子ELISA检测各组上清液中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α浓度;RT-qPCR检测各组细胞中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA含量。第二部分MiR-145通过靶向下调PDCD4减轻机械牵张所致NR8383细胞炎性反应1.双荧光素酶报告基因实验1.1 构建野生型（wild type,WT）及突变型（mutant type,MUT）PDCD4 3’UTR的质粒载体选用同时包含萤火虫荧光素酶基因和海肾荧光素酶基因的pmirGLO质粒作为基因载体,将野生型和突变型的PDCD4 3’ UTR序列分别插入到pmirGLO质粒萤火虫荧光素酶基因的3’UTR区;野生型PDCD43’UTR序列为含有miR-145预测结合位点（AACUGGAA）的PDCD4 3’ UTR片段,突变型PDCD4 3’ UTR是将miR-145的预测结合位点进行突变后的PDCD4 3’ UTR片段。1.2细胞分组及转染选择HEK293T细胞作为工具细胞,分为4组:（1）Mimic+WT组,共转染miR-145 mimic 和野生型 PDCD4 3’UTR 质粒;（2）Mimic-NC+WT 组,共转染miR-145 mimic-NC 和野生型 PDCD43’UTR 质粒;（3）Mimic+MUT 组,共转染miR-145 mimic 和突变型 PDCD4 3’UTR 质粒;（4）Mimic-NC+MUT 组,共转染miR-145 mimic-NC和突变型PDCD4 3’UTR质粒。使用lipo2000转染试剂进行转染,转染后6h更换为完全培养基,继续培养48h。1.3检测双荧光素酶活性报告基因细胞裂解液裂解各孔细胞,离心后检测上清液中的萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的活性,以海肾荧光素酶活性为内参,萤火虫荧光素酶活性为观察指标,结果以二者发光值的比值表示。2.上调/下调 miR-145对NR8383细胞中PDCD4 mRNA及蛋白表达的影响提取本实验第一部分中C组、Mimic组、Mimic-NC组、Inhibitor组、Inhibitor-NC组细胞的RNA和总蛋白,RT-qPCR和western blot检测各组细胞中PDCD4 mRNA和PDCD4蛋白的相对表达量。3.PDCD4 siRNA 转染 NR8383 细胞3.1细胞分组及转染取处于对数生长期的NR8383细胞,分组及处理如下:（1）C组,对照组,不进行转染;（2）SiR 组,转染 PDCD4 siRNA;（3）SiR-NC 组,转染 PDCD4 siRNA-NC。使用lipo2000转染试剂进行转染,转染后6h更换为完全培养基,继续培养48h。3.2验证转染效果培养48h后,提取细胞RNA和总蛋白。RT-qPCR和Western blot检测PDCD4 mRNA和PDCD4蛋白表达量,验证转染效果。4.下调PDCD4表达对机械牵张所致NR8383细胞炎性反应的影响4.1机械牵张细胞转染PDCD4 siRNA成功后,根据分组计划将细胞接种到预先铺有胶原的Flexcell应力加载系统的6孔板内,细胞密度为1*105/cm2。分组及处理如下:（1）C组为对照组,未转染的细胞,不加载机械牵张;（2）MS组,对未转染的细胞加载机械牵张,参数同前;（3）SiR+MS组,对转染PDCD4 siRNA的细胞加载机械牵张,参数同MS组;（4）SiR-NC+MS组,对转染PDCD4 siRNA-NC的细胞加载机械牵张,参数同MS组。4.2检测炎性因子ELISA检测各组上清液中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量;RT-qPCR检测各组细胞中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA含量。5.下调PDCD4减轻机械牵张所致NR8383细胞炎性反应的可能机制5.1下调PDCD4对机械牵张NR8383细胞时核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）活性的影响提取各组细胞的胞浆蛋白和核蛋白,采用western blot和转录因子酶联免疫分析两种方法检测NF-κB活性。5.2下调PDCD4对机械牵张NR8383细胞时抗炎因子IL-10表达的影响ELISA检测各组上清液中IL-10含量,RT-qPCR检测各组细胞中IL-10 mRNA含量。第三部分miR-145对大潮气量机械通气所致大鼠肺组织炎症反应和肺损伤的影响1.大鼠在体转染 miR-1451.1大鼠分组及转染雄性清洁级Wistar大鼠,48只,随机分为3组:（1）Control组,24只,不进行转染,注射与转染组等体积的5%葡萄糖;（2）MiR组,12只,转染miR-145 mimic;（3）MiR-NC 组,12 只,转染 miR-145 mimic-NC。采用 EntransterTM-in vivo转染试剂进行大鼠在体转染。1.2验证转染效果转染72h后,每组随机选取6只大鼠,处死后收集肺组织提取RNA和总蛋白。RT-qPCR检测肺组织中miR-145含量,Western blot检测肺组织PDCD4表达,在基因和靶蛋白水平验证转染效果。2.上调miR-145对大鼠VILI的影响2.1建立大鼠VILI模型MiR-145在体转染成功后,通过大潮气量机械通气的方法建立大鼠VILI模型。分组及处理如下（n=6）:（1）SHAM组,未转染大鼠保留自主呼吸,为对照组;（2）LMV组,未转染大鼠行6ml/kg的小潮气量机械通气（为排除肌肉松弛药的影响而设立此组）;（3）HMV组,未转染大鼠行20ml/kg的大潮气量机械通气;（4）MiR+HMV 组,转染 miR-145 mimic 的大鼠,处理同 HMV 组;（5）MiR-NC+HMV组,转染miR-145 mimic-NC的大鼠,处理同HMV组。为防止自主呼吸和机械通气相对抗,所有机械通气大鼠在通气期间均给予肌肉松弛药罗库溴铵,SHAM组给予等体积的生理盐水。各机械通气组其余通气参数设置:通气频率为50次/分,PEEP均为0,FiO2为21%（室内空气）,吸呼比（I/E）为1:1,通气时间4h。通气结束后处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）及肺组织。2.2检测肺组织中miR-145含量提取肺组织RNA,RT-qPCR检测各组大鼠肺组织中miR-145含量。2.3检测肺损伤HE染色病理学检查,肺组织湿重/干重（wet weight/dry weight,W/D）比值检测,髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）活性检测,BALF中总蛋白浓度检测。2.4检测炎性因子及其mRNAELISA 检测各组 BALF 中炎性因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）浓度,RT-qPCR检测各组肺组织中炎性因子的mRNA表达量。2.5检测NF-κB活性提取肺组织的胞浆蛋白及核蛋白,Western blot和转录因子酶联免疫分析两种方法检测NF-κB的活性变化。2.6检测抗炎因子IL-10及其mRNAELISA检测各组BALF中IL-10含量,RT-qPCR检测各组肺组织中IL-10的mRNA表达量。统计学分析本研究使用SPSS25.0统计软件进行分析。符合正态分布的实验数据以均数±标准差（mean ± SD）表示。数据分析时,首先进行方差齐性检验;两组组间比较采用独立样本t检验的方法（方差不齐时采用t’检验）;多组间比较采用单因素方差分析（one way ANOVA）的统计方法（方差不齐时采用welch法）,事后组间多重比较采用LSD法。P＜0.05代表差异具有统计学意义。结果第一部分1.机械牵张可导致NR8383细胞炎性因子分泌增加ELISA结果显示:MS组（机械牵张组）上清液中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α浓度均较C组（对照组,未牵张）明显增高（P＜0.01）。2.机械牵张可导致NR8383细胞中miR-145表达下降RT-qPCR结果显示:MS组细胞中miR-145表达量较C组明显降低（P＜0.01）。3.转染 miR-145 mimic和 miR-145 inhibitor 可上调和下调 NR8383 细胞中 miR-145 含量转染 miR-145 mimic 及其阴性对照（NC）、miR-145 inhibitor及其 NC 后,RT-qPCR检测转染效果。结果显示:Mimic组细胞中miR-145含量较C组明显上调（P＜0.01）;Inhibitor组细胞中miR-145含量较C组明显下调（P＜0.01）;Mimic-NC组、Inhibitor-NC组细胞中的miR-145含量均同C组无明显差别。4.上调miR-145可减轻机械牵张导致的NR8383细胞炎性反应ELISA 及 RT-qPCR 结果显示:Mimic+MS 组（转染 miR-145 mimic 后机械牵张）上清液中炎性因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）浓度以及细胞中炎性因子mRNA的表达量均较MS组明显降低（P＜0.01）,Mimic-NC+MS组同MS组无明显差异。5.下调miR-145可加重机械牵张导致的NR8383细胞炎性反应ELISA 及 RT-qPCR 结果显示:Inhibitor+MS 组（转染 miR-145 inhibitor 后机械牵张）上清液中炎性因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）浓度以及细胞中炎性因子mRNA的表达量均较MS组明显增加（P＜0.01）,Inhibitor-NC+MS组同MS组无明显差异。第二部分1.MiR-145 可与 PDCD4 3’ UTR 靶向结合我们将PDCD4 3’UTR的野生型（WT）及突变型（MUT）质粒载体分别和miR-145 mimic、miR-145 mimic-NC 共转染 HEK293T 细胞 48h 后,进行了双荧光素酶活性的检测分析。结果发现:相比于Mimic-NC+WT组,Mimic+WT组细胞萤火虫荧光素酶活性明显降低（P＜0.01）;而将预测的PDCD4 3’UTR结合位点（AACUGGAA）进行突变后,Mimic+MUT组和Mimic-NC+MUT组的萤火虫荧光素酶活性无明显区别。该结果表明miR-145可靶向结合PDCD4 3’ UTR的“AACUGGAA”碱基序列。2.MiR-145可在转录后水平负调控NR8383细胞中PDCD4的表达通过miR-145 mimic及inhibitor转染的方法上调/下调NR8383细胞中miR-145 含量后,我们检测了 miR-145 含量改变对细胞中 PDCD4 mRNA 及 PDCD4蛋白表达的影响。RT-qPCR及Western blot结果显示:同C组相比,Mimic组（转染miR-145 mimic）细胞中PDCD4mRNA表达量无明显变化,PDCD4蛋白表达量显著降低（P＜0.01）;同C组相比,Inhibitor组（转染miR-145 inhibitor）细胞中PDCD4 mRNA表达量无明显变化,PDCD4蛋白表达量显著增加（P＜0.01）;Mimic-NC组、Inhibitor-NC组细胞中的PDCD4 mRNA及蛋白含量均同C组无明显差别。该结果和双荧光素酶报告基因实验结果可共同表明:miR-145可靶向PDCD43’UTR,抑制PDCD4mRNA的翻译,在转录后水平负调控PDCD4蛋白的表达。3.转染PDCD4 siRNA可下调NR8383细胞中PDCD4 mRNA和PDCD4蛋白的表达转染PDCD4 siRNA 48h后,我们使用RT-qPCR及western blot在基因和蛋白两个层面检测了转染效果。结果显示:同C组相比,SiR组细胞中的PDCD4 mRNA及PDCD4蛋白含量均明显降低（P＜0.01）;SiR-NC组中PDCD4 mRNA及PDCD4蛋白含量和C组无明显差异。4.下调PDCD4表达可减轻机械牵张导致的NR8383细胞炎性反应ELISA及RT-qPCR结果显示:SiR+MS组（转染PDCD4 siRNA后机械牵张）上清液中炎性因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）浓度及肺组织中炎性因子mRNA表达量均较MS组明显降低（P＜0.01）,SiR-NC+MS组同MS组无明显差异。5.下调PDCD4表达可抑制机械牵张导致的NR8383细胞NF-κB激活NF-κB激活后从胞浆转移到核内发挥作用,检测NF-κB p65亚基在细胞核和细胞浆内的分布可反映其活化程度。Western blot结果显示:同C组相比,MS组胞浆内p65含量明显减少（P＜0.01）,核内p65含量明显增多（P＜0.01）,表明机械牵张后NF-κB活化入核增多;同MS组相比,SiR+MS组胞浆内p65含量增多（P＜0.05）,核内p65含量明显减少（P＜0.01）,表明下调PDCD4表达可减少机械牵张导致的NF-κB活化。转录因子酶联免疫分析（TF-EIA）法可检测处于活化状态的NF-κB,其检测结果与Western blot相一致:MS组活化状态的NF-κB 较 C 组增多（P＜0.01）,SiR+MS 组活化状态的 NF-κB 较 MS 组减少（P＜0.01）,SiR-NC+MS组与MS组无明显差异。上述两种检测方法的结果均表明,机械牵张可导致NF-κB激活,而下调PDCD4可抑制NF-κB的激活。6.下调PDCD4表达可在转录后水平进一步增加机械牵张时IL-10的生成ELISA及RT-qPCR结果显示:MS组上清液中抗炎因子IL-10浓度及细胞中IL-10 mRNA均较C组显著增高（P＜0.01）;SiR+MS组上清液中IL-10浓度较MS组进一步增高（P＜0.01）,而细胞中IL-10mRNA相对表达量较MS组无统计学差异。该结果表明,下调PDCD4对IL-10 mRNA本身含量无明显影响,但可在转录后水平增加IL-10的蛋白表达。第三部分1.转染miR-145 mimic可上调大鼠肺组织中miR-145含量RT-qPCR结果显示:同Control组相比,MiR组（转染miR-145 mimic）大鼠肺组织中miR-145含量显著增多（P＜0.01）,MiR-NC组miR-145含量同Control组无明显差异。2.转染miR-145 mimic可抑制大鼠肺组织中PDCD4蛋白表达Western blot结果显示:同Control组相比,MiR组大鼠肺组织中PDCD4表达量明显降低（P＜0.01）,MiR-NC组PDCD4表达量同Control组无明显差异。该结果在靶蛋白层面证明了在体转染miR-145 mimic达到了预期效果,同时也在动物整体水平表明了 miR-145对PDCD4的调控作用。3.大潮气量机械通气可降低大鼠肺组织中miR-145含量,转染miR-145 mimic可使机械通气时肺组织中miR-145保持高含量状态RT-qPCR结果显示:同SHAM组（自主呼吸组）相比,HMV组（大潮气量机械通气组）大鼠肺组织中miR-145含量明显下降（P＜0.05）;MiR+HMV组（转染miR-145 mimic后行大潮气量机械通气）大鼠肺组织中miR-145含量较SHAM组和HMV组均显著增高（P＜0.01）;LMV组与SHAM组、MiR-NC+HMV组与HMV组之间,miR-145含量均无统计学差异。该结果表明:大潮气量机械通气可降低大鼠肺组织中miR-145含量;转染miR-145 mimic的大鼠在机械通气期间miR-145始终处于上调水平,符合我们的实验要求。4.上调miR-145可减轻大潮气量机械通气导致的肺组织病理性损伤,降低病理损伤评分与SHAM组相比,HMV组大鼠肺组织结构破坏严重,部分肺泡断裂,炎性细胞浸润增多,肺泡及间质水肿明显,肺组织病理损伤评分明显增高（P＜0.01）;转染miR-145 mimic后,MiR+HMV组大鼠病理学改变较HMV组大鼠整体好转,病理损伤评分亦降低（P＜0.01）;LMV组和SHAM组之间,MiR-NC+HMV组和HMV组之间,肺组织病理损伤程度及评分均无明显差异。5.上调miR-145可减轻大潮气量机械通气导致的肺水肿肺组织湿重/干重（W/D）比值可直观反映肺水肿的程度。HMV组肺组织W/D比值较SHAM组明显增高（P＜0.01）;转染miR-145 mimic后,MiR+HMV组肺组织W/D比值较HMV组下降（P＜0.01）;LMV组和SHAM组之间、MiR-NC+HMV组和HMV组之间,肺组织W/D值均无明显差异。6.上调miR-145可减少大潮气量机械通气导致的肺组织中性粒细胞浸润MPO活性与中性粒细胞含量成正比。HMV组肺组织中MPO活性较SHAM组明显升高（P＜0.01）;转染miR-145 mimic后,MiR+HMV组肺组织中MPO活性较HMV组明显下降（P＜0.01）;LMV组和SHAM组之间、MiR-NC+HMV组和HMV组之间,肺组织MPO活性均无明显差异。7.上调miR-145可减少大潮气量机械通气导致的支气管肺泡腔中蛋白渗出我们使用BCA法检测了各组BALF中的蛋白含量,结果表明:HMV组BALF中蛋白含量较SHAM组明显增多（P＜0.01）;转染miR-145 mimic后,MiR+HMV组BALF中蛋白含量较HMV组明显减少（P＜0.01）;LMV组和SHAM组之间、MiR-NC+HMV组和HMV组之间,BALF中蛋白含量均无明显差异。8.上调miR-145可减少大潮气量机械通气导致的炎性因子分泌及其mRNA表达ELISA 及 RT-qPCR 结果显示:HMV 组 BALF 中 IL-1β、IL-6、TNF-α 三种炎性因子浓度及肺组织中炎性因子mRNA表达量均较SHAM组明显增高（P＜0.01）;转染miR-145 mimic后,MiR+HMV组大鼠BALF中三种炎性因子浓度及肺组织中炎性因子mRNA表达量较HMV组均明显减少（P＜0.01）;MiR-NC+HMV 组和 HMV 组之间炎性因 子及其 mRNA 表达量均无明显差异。9.上调miR-145可抑制大潮气量机械通气诱导的NF-κB激活Western blot的结果显示:同SHAM组相比,HMV组大鼠肺组织胞浆内p65明显减少（P＜0.01）,核内p65明显增多（P＜0.01）,表明大潮气量机械通气可导致NF-κB活化入核增多;同HMV组相比,MiR+HMV组大鼠肺组织胞浆内p65明显增多（P＜0.01）,核内p65明显减少（P＜0.01）,表明上调miR-145可使NF-κB活化入核减少。转录因子酶联免疫分析的结果和western blot相一致:HMV组大鼠肺组织中NF-κB活性较SHAM组明显增强（P＜0.01）;MiR+HMV组肺组织中NF-κB活性较HMV组明显降低（P＜0.01）。两种检测方法结果均表明,大潮气量机械通气可激活肺组织细胞中的NF-κB信号通路,而上调miR-145可抑制大潮气量机械通气导致的NF-κB信号通路激活。10.上调miR-145可在转录后水平增加IL-10生成ELISA及RT-qPCR结果显示:HMV组BALF中IL-10浓度及肺组织中IL-10 mRNA表达量均较SHAM组增高;转染miR-145 mimic上调miR-145表达后,MiR+HMV组大鼠BALF中IL-10含量较HMV组进一步增多（P＜0.01）,但IL-10 mRNA含量同HMV组无明显差别;LMV组和SHAM组之间、MiR-NC+HMV 组和 HMV 组之间,IL-10 及其 mRNA 表达均无明显差异。结论MiR-145可靶向下调PDCD4表达,进而减少NF-κB激活、在转录后水平增加IL-10生成,发挥减轻机械牵张所致肺泡巨噬细胞（NR8383细胞）炎性反应、减轻大鼠呼吸机相关性肺损伤的作用。