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背景与目的肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是发病率高、恶性程度高、预后差的恶性肿瘤,很多患者在确诊时已处于中晚期,治疗效果不尽人意。因此早期诊断肝癌、及时手术治疗和术后复发的早期发现对于提高患者生存率是十分重要的。而早期诊断的关键在于寻找高敏感性,高特异性的肝癌标志物。HTA基因是本实验室刘妍博士通过生物信息学方法筛选并从肝癌细胞系中克隆得到新的的肿瘤相关基因,前期实验结果推测它与肝癌的发生相关,有可能作为肝癌诊断的标志物。然而前期的研究主要针对HTA对肝癌细胞系的功能性探索,在各组织器官中的表达情况研究有限且样本量少。针对肝癌组织、对应的癌旁组织及正常肝组织中HTA的表达情况及其与临床病理方面的联系研究也未开展。.因此,本课题拟通过免疫组织化学技术检测HTA作为肝癌肿瘤标志物的价值,分析HTA在肝癌中的表达与临床病理参数的相关性,并结合前期基因芯片的结果,分析HTA与相关差异基因ADAMs表达的相关性,为提高肝癌患者的存活率,改善预后奠定基础。方法收集13种肿瘤的组织切片,共334例,通过免疫组织化学检测HTA在各种肿瘤中的表达情况,评估HTA作为肝癌肿瘤标志物的价值。收集32对临床手术切除的肝癌组织、癌旁组织及12例手术切除的血管瘤旁正常肝脏组织,在mRNA和蛋白水平分别验证HTA在肝癌组织中的表达情况,结合临床病案记录,分析HTA表达水平与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤分化程度、肝内转移、AFP水平等临床病理资料间的关系。根据课题组前期基因芯片结果筛选到HTA与ADAM9、ADAM17具有一定的相关性,本课题设计通过Q-PCR及Western blotting在RNA水平及蛋白水平上分别验证HTA与不同细胞系HepG2/si-HTA、HepG2/si-Mock、QSG7701-c、QSG7701-HTA中ADAM9、ADAM17表达的相关性,并采用免疫组织化学验证HTA与ADAM、ADAM17在50例肝癌组织中表达的相关性。结果1.采用免疫组织化学技术在13种肿瘤组织中检测HTA的表达,结果显示HTA蛋白在肝癌(62.00%)、肺癌(10.87%)、结肠癌(35.48%)、胃癌(20.00%)、直肠癌(14.29%)、宫颈癌(23.08%)等多种肿瘤中表达,而在肾癌、膀胱癌、乳腺癌、食管癌等组织中无表达。并且HTA蛋白在肝癌中的表达显著高于其它肿瘤(P<0.05)。2.采用Q-PCR技术在32对新鲜的肝癌组织、对应的癌旁组织及12例正常肝组织中检测HTA mRNA的表达水平,结果显示HTA基因在肝癌中的mRNA表达水平明显高于癌旁组织及正常组织(P<0.05)。3.采用免疫组织化学技术在50例肿瘤组织、对应的癌旁组织及20例正常肝组织中检测HTA蛋白的表达水平,结果显示HTA在肝癌组织中呈高表达,在癌旁组织及正常肝组织中低表达或者不表达,且阳性染色主要集中在胞浆中,胞核或胞膜中很少有表达。4.采用χ2检验分析HTA蛋白的表达水平与肝癌临床病理资料的相关性,结果显示HTA蛋白在肝癌组织中的表达与转移相关(P<0.05)；采用t检验分析HTA mRNA的表达水平与肝癌临床病理资料的相关性,结果显示HTA mRNA在肝癌组织中的表达与分化程度(高分化vs中/低分化：0.605±0.086vs0.226±0.008,P=0.032),转移(转移vs未转移：0.819±0.040vs0.285±0.005,P=0.012)相关。5.采用Q-PCR、Western blotting及免疫组织化学在不同的肝癌细胞系及肝癌组织中检测HTA与肿瘤转移因子ADAM9及ADAM17呈正相关。结论1.HTA在肝癌组织中高表达,在其它肿瘤组织中低表达或者不表达。2.HTA在肝癌组织中的表达水平与转移具有相关性,与性别、年龄、肿瘤大小、分期等均无关。3.HTA与肿瘤转移因子ADAM9、ADAM17呈正相关。