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目的:对贵州喀斯特地区民族药材中提取的181个化合物进行抗炎活性筛选,进一步评价活性化合物的成药性,对具有成药性的化合物进行体内外生物学活性的研究,并阐明其分子作用机制。方法:一、来自贵州喀斯特地区民族药材的化合物抗炎活性的筛选和成药性评价1.建立脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎症模型:LPS（50 ng/m L）处理小鼠腹腔巨噬细胞4 h,ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞上清液中TNF-α和IL-6释放量;2.初步活性筛选:LPS处理小鼠腹腔巨噬细胞,并给予化合物（52μM）处理4h,ELISA法检测培养上清液中IL-6释放量;3.细胞毒性检测:化合物处理小鼠腹腔巨噬细胞4 h后,CCK-8法检测细胞活力;4.41个活性化合物的二次筛选:LPS处理小鼠腹腔巨噬细胞,并给予化合物处理4 h,ELISA法检测培养上清液中TNF-α和IL-6释放量。5.活性化合物的安全性评价:不同浓度的化合物处理小鼠腹腔巨噬细胞4 h,CCK-8法检测细胞活力;6.18个活性化合物的成药性评价:从活性、细胞毒性、“Lipinski类药5原则”、溶解性、可获取性进行评价,Scifinder数据库检索化合物是否符合“Lipinski类药5原则”以及溶解度。二、异紫堇碱抗炎作用的体内、体外研究1.明确异紫堇碱的体外抗炎活性:LPS处理小鼠腹腔巨噬细胞,以地塞米松作为阳性药物对照,给予异紫堇碱（52μM）处理4 h,ELISA法检测细胞上清液中TNF-α和IL-6释放量;2.异紫堇碱对细胞活力的影响:异紫堇碱（52μM）处理小鼠腹腔巨噬细胞24 h,以及处理RAW264.7细胞24 h和48 h,CCK-8检测细胞活力;3.LPS攻击小鼠模型的建立:BALB/C小鼠尾静脉注射LPS（30、40、50 mg/kg）,观察小鼠7天死亡率;4.异紫堇碱对LPS攻击模型小鼠的保护作用:LPS（30 mg/kg）攻击BALB/C小鼠,以地塞米松作为阳性药物对照,腹腔注射给予异紫堇碱（1.7、5、15 mg/kg）,ELISA法检测血清、脾和肺组织中TNF-α、IL-6和IL-β水平;H＆E染色观察肺组织病理变化情况。三、异紫堇碱抗炎作用的分子机制研究1.异紫堇碱对TLR4/My D88/TRAF6/NFκB信号通路关键分子的影响:LPS处理小鼠腹腔巨噬细胞,同时给予异紫堇碱处理2 h,q PCR技术检测异紫堇碱对Tlr4、Myd88、Traf6、Rel A（NFκB p65的编码基因）和Tnf-αmRNA表达的影响;WB技术检测异紫堇碱对TLR4、My D88、TRAF6和TNF-α蛋白水平表达的影响;激光共聚焦显微镜观察异紫堇碱对小鼠腹腔巨噬细胞中NFκB p65分布的影响;ELISA法检测异紫堇碱对小鼠腹腔巨噬细胞浆和核蛋白中NFκB p65蛋白的影响。2.异紫堇碱对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞中VDR分子的影响:LPS处理小鼠腹腔巨噬细胞,同时给予异紫堇碱处理4 h;q PCR技术检测异紫堇碱对Vdr mRNA表达的影响;ELISA法检测异紫堇碱对小鼠腹腔巨噬细胞浆和核蛋白中VDR蛋白的影响。结果:一、来自贵州喀斯特地区民族药材的化合物抗炎活性的筛选和成药性评价1.初步筛选结果显示,在181个化合物中有41个化合物具有抗炎作用;2.二次筛选结果显示,在41个化合物中有18个化合物具有显著抗炎作用,可抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6;3.化合物Hx-150（异紫堇碱）的成药性评分最高,可作为候选化合物进行后续研究。二、异紫堇碱抗炎作用的体内、体外研究1.异紫堇碱可显著抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和IL-6的释放;2.异紫堇碱对小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264.7细胞活力没有影响;3.异紫堇碱可降低LPS攻击模型小鼠血清、脾和肺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平,并可改善LPS诱导的肺组织损伤。三、异紫堇碱抗炎作用的分子机制研究1.异紫堇碱显著降低LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞中Tnf-αmRNA及蛋白水平,但对Tlr4、Myd88、Traf6 mRNA及蛋白水平无显著影响;2.异紫堇碱对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞中Rel A mRNA无影响,但可增加胞浆中NFκB p65蛋白水平,降低胞核中NFκB p65蛋白水平,显著抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞中NFκB p65的核转位;3.异紫堇碱能显著上调Vdr mRNA表达,并能增加胞核中VDR蛋白水平,但对胞浆中VDR蛋白水平无显著影响。结论:1.通过对贵州喀斯特地区民族药材中181个化合物进行抗炎活性的筛选和成药性评价,得到较好抗炎活性和成药性的异紫堇碱作为候选化合物;2.异紫堇碱可显著降低LPS诱导的前炎症细胞因子释放水平,并改善肺组织损伤,具有良好的体内、体外抗炎作用。3.异紫堇碱的抗炎作用机制与抑制NFκB p65的核转位密切相关,且异紫堇碱通过上调Vdr mRNA表达和VDR在核中的分布从而抑制NFκB p65的核转位。4.来自贵州喀斯特地区的异紫堇碱具有良好的体内体外抗炎活性,值得进行更深入的研究。