近年来,芸薹属根肿病在大白菜及其他十字花科作物上发生频繁,严重影响十字花科作物的产量和品质。自然界中根肿菌在多种生理小种混生状态下侵染寄主,同一来源的根肿菌中存在不同的致病型,所以利用单孢分离进行纯化和分离生理小种可能更有价值。本研究建立了一套较完善的单孢分离技术体系;利用此体系对沈阳和山东地区根肿菌进行了单孢分离和鉴定;预测了根肿菌rDNA中ITS区域大致位置,并利用PCR技术检测了不同生理小种之间在分子水平上的差异。具体结果如下:本研究通过优化接菌方法、接种苗龄及植株的培养程序,建立了芸薹属根肿菌单孢分离技术体系,即采用琼脂糖块冷冻盒法将根肿菌单孢接种在2-3日龄幼苗的根系上,后期采用水培-基质过度培育-土培结合的方法培育接菌植株。该体系可使根肿菌单孢侵染率达到47.8%,植株成活率达到67%。采用上述优化后的单孢分离体系对沈阳地区和山东地区进行单孢分离及Williams生理小种鉴定,在沈阳地区根肿菌中分离出4、8、9、11号单孢生理小种,在山东地区根肿菌中分离出1、2、4、8、9、11、13、15、16号单孢生理小种,发现沈阳和山东地区的优势生理小种均为4号单孢生理小种。比较分析了CTAB法、硅藻土法及试剂盒法3种根肿菌DNA提取方法的优缺点的比较,同时采用菌液直接作为模板进行PCR检测,发现用试剂盒法和直接利用菌液进行PCR检测能更好地排除植物寄主的影响;从NCBI数据库中搜索根肿菌序列进行Blastn比对,并与同源性较高的其它真菌序列进行同源分析,预测了根肿菌ITS区域的大致位置,通过PCR技术检测不同生理小种,初步推测其在18S、ITS-1、ITS2-2区域上存在着差异。综上所述,同一来源根肿菌确实存在着不同的生理小种,各生理小种在根肿菌在18S及ITS区域上可能存在着差异。