更年期综合征是指女性在绝经期前后(一般发生于45-52岁之间),因卵巢功能退行性衰退,体内分泌的雌激素水平明显下降而导致的心血管、神经、内分泌系统功能紊乱,临床表现有功能性子宫出血、阵发性潮热和出汗,外阴和阴道萎缩、骨质疏松等症状及出现精神和植物神经系统的症状。随着我国人口结构不断的老龄化,该病有发病年龄提早、发病率上升的趋势,严重影响了占妇女一生中三分之一时间的围绝经期及绝经后期的健康问题和生活质量。目的通过观察坤宝颗粒对自然衰老大鼠及拟更年期综合征模型动物的自主活动、血中性激素水平、相关器官重量、性器官组织形态、脑组织去甲肾上腺素、5-羟色胺等神经递质含量的影响,探讨坤宝颗粒治疗女性更年期综合征的药理作用及机理。方法与结果第一部分坤宝颗粒对自然衰老大鼠(准老年大鼠)的药理作用研究1.对自然衰老大鼠(准老年大鼠)自主活动的影响:分别以大、中、小三个剂量(1.62g生药/kg,0.81g生药/kg,0.41g生药/kg)连续给药23天,通过旷场试验观察准老年对照组和各个给药组动物被放入箱内3分钟所走的格子数(以四肢走到同一格内为活动一次)及站立修饰次数。与准老年对照组比较,坤宝颗粒能明显减少自然衰老大鼠活动中站立张望修饰次数。2.对自然衰老大鼠(准老年大鼠)记忆功能的影响:分别以大、中、小三个剂量(1.62g生药/kg,0.81g生药/kg,0.41g生药/kg)连续给药26天,通过避暗试验观察准老年对照组和各个给药组动物进入暗室的潜伏期和3分钟内遭电击的次数。与准老年对照组比较,坤宝颗粒0.81g生药/kg、0.41g生药/kg剂量,可延长衰老大鼠进入暗室的潜伏期,减少错误次数。3.对自然衰老大鼠(准老年大鼠)血中激素水平、性器官及肾上腺重量的影响:分别以大、中、小三个剂量(1.62g生药/kg,0.81g生药/kg,0.41g生药/kg)连续给药28天,于末次给药1小时后用放射免疫法测血清中雌二醇和孕酮的含量。并取动物的卵巢、子宫、肾上腺,称脏器湿重,计算脏器系数。与准老年对照组比较,坤宝颗粒能提高大鼠血清中雌二醇含量;对大鼠血清中孕酮的含量有不同程度的提高,中剂量效果较显著;对衰老大鼠的子宫、卵巢、肾上腺的脏器系数均有不同程度的增加。4.对自然衰老大鼠(准老年大鼠)脑内儿茶酚胺含量的影响:分别以大、中、小三个剂量(1.62g生药/kg,0.81g生药/kg,0.41g生药/kg)连续给药28天,用HPLC法测定脑组织中的5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)的含量。与准老年对照组比较,坤宝颗粒对衰老大鼠脑皮层中的去甲肾上腺素(NE)有明显升高作用;坤宝颗粒对脑组织中多巴胺(DA)、和5-羟色胺(5-HT)含量无明显的影响。5.对自然衰老大鼠(准老年大鼠)性器官组织形态学的影响:分别以大、中、小三个剂量(1.62g生药/kg,0.81g生药/kg,0.41g生药/kg)连续给药28天,观察卵巢的组织学形态,进行黄体、各发育不同阶段的卵泡计数;观察子宫的组织学形态,进行子宫横切面子宫腺泡计数,测量子宫内膜厚度。与准老年对照组比较,坤宝颗粒大剂量组能够促进衰老大鼠卵巢中的卵泡和黄体发育,增加卵泡中的卵泡数和黄体数;并且能够增加衰老大鼠子宫腺泡数量,增加子宫内膜厚度。第二部分坤宝颗粒对去势叠加应激刺激模型小鼠的药理作用研究1.对去势叠加应激刺激模型小鼠戊巴比妥钠阈下催眠剂量的影响:分别以大、中、小三个剂量(2.32g生药/kg,1.16g生药/kg,0.58g生药/kg)连续给药11天,末次给药50分钟后,模型组、给药组、空白组动物腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg,以给药后15分钟内小鼠翻正反射消失达1分钟以上作为入睡指标,记录睡眠动物个数。与模型对照组比较,坤宝颗粒对戊巴比妥钠阈下催眠剂量有一定的协同作用,增加小鼠入睡个数,睡眠百分率均达到50%以上。2.对去势叠加应激刺激模型小鼠延长戊巴比妥钠催眠时间的影响:分别以大、中、小三个剂量(2.32g生药/kg,1.16g生药/kg,0.58g生药/kg)连续给药11天,末次给药1小时后,腹腔注射戊巴比妥钠35mg/kg,观察小鼠睡眠潜伏期和维持时间。可不同程度地缩短去势小鼠的睡眠潜伏期,延长去势小鼠的睡眠时间。3.对去势叠加应激刺激模型小鼠血中激素水平的影响:分别以大、中、小三个剂量(2.32g生药/kg,1.16g生药/kg,0.58g生药/kg)连续给药15天,末次给药1小时后,用放射免疫法测定去势小鼠血清中雌二醇和孕酮的含量。坤宝颗粒对小鼠血清中雌二醇及孕酮含量未见明显影响。第三部分坤宝颗粒对盐酸吗啡引起举尾反应的影响分别以大、中、小三个剂量(2.32g生药/kg,1.16g生药/kg,0.58g生药/kg)连续给药8天,末次给药1小时后,各组小鼠肌内注射盐酸吗啡20mg/kg,观察小鼠由兴奋、紧张引起的竖尾反应潜伏期。与空白对照组比较,坤宝颗粒各剂量组均能延长吗啡引起的竖尾反应潜伏期。第四部分坤宝颗粒对记忆功能的作用研究1.对小鼠学习和记忆获得障碍的影响—水迷宫法:分别以大、中、小三个剂量(2.32g生药/kg,1.16g生药/kg,0.58g生药/kg)连续给药10天,于末次给药1小时后,除空白对照组外,其余各组动物均腹腔注射东莨菪碱溶液5mg/kg,观察小鼠从水迷宫记录仪起点至终点登台的时间,记录走错误路线的次数。与模型对照组比较,坤宝颗粒大剂量,可缩短模型小鼠上岸时间;各剂量组均能减少模型小鼠错误次数。2.小鼠学习和记忆获得障碍的影响—避暗法:分别以大、中、小三个剂量(2.32g生药/kg,1.16g生药/kg,0.58g生药/kg)连续给药7天,于末次给药1小时后,除空白对照组外,其余各组动物均腹腔注射樟柳碱10mg/kg,记录3分钟内小鼠潜伏期和错误次数。与模型对照组比较,坤宝颗粒各剂量组均可延长小鼠进入暗室的潜伏期,减少错误次数。结论坤宝颗粒对自然衰老大鼠有一定的镇静作用和改善记忆的作用;能够明显增加自然衰老大鼠血中雌激素的水平;改善由于植物神经系统功能紊乱出现的失眠健忘、焦虑等症状;对自然衰老大鼠性器官组织形态学有一定的改善作用。实验中坤宝颗粒对自然衰老大鼠脑组织中的去甲肾上腺素(NE)有明显升高作用,且具有较好的量效关系;而对脑组织中多巴胺(DA)、和5-羟色胺(5-HT)含量则没有明显的影响。根据上述实验结果,分析推断坤宝颗粒治疗更年期综合征可能是通过升高血清中雌二醇和孕酮含量,改善由于激素分泌而引起的内分泌失调和植物神经紊乱的综合症状,减少由于紧张引起的活动次数的增加,改善记忆功能和睡眠功能,延缓卵巢的衰老,诸多因素共同调节机体功能,提高更年期妇女的生活质量。有关坤宝颗粒治疗更年期综合征的确切机理有待进一步研究。