为解决当前水产养殖所面临的水体富营养化、药物残留、病原微生物抗药性等问题,微生态制剂逐渐引入到水产养殖中来。芽孢杆菌作为水产微生态制剂的菌株使用较光合细菌、硝化细菌、乳酸菌等菌株晚,但芽孢杆菌有几方面的优势：产酶丰富,对水质改良和底泥处理有作用；产生细菌素,抑制好氧致病菌生长；产生具有抗性的芽孢,能够耐受加工工艺的苛刻条件。市场上的芽孢杆菌产品虽多,但欠缺有效性和针对性。目前,国内外同类研究大都着眼在菌株筛选和特性研究上,而水产用微生态制剂生产工艺还比较粗放,从而影响产品的有效性和稳定性。 本项研究从水产养殖环境中分离出多株芽孢杆菌,并进一步筛选出产酶丰富的菌株作为水产用微生态制剂研究的初始菌种,命名为枯草芽孢杆菌YB1。收集到应用于枯草芽孢杆菌发酵产芽孢的4种培养基,通过摇床培养筛选出较适宜菌YB1发酵的培养基配方(玉米淀粉10g/L,玉米浆20g/L,NH4Cl 5g/L,K2HPO4 3g/L,CaCl2 0.2g/L,MgSO4·7H2O 0.2g/L,MnSO4·H2O 0.1g/L)作为下一步优化的初始培养基。应用单因素实验及正交实验确定了最终的培养基配方(玉米淀粉18g/L,玉米浆15g/L,NH4Cl 6g/L,K2HPO4 3g/L,CaCl2 0.2g/L,MgSO4·7H2O 0.2g/L,MnSO4·H2O 0.2g/L)。 确定了培养基配方后,通过对温度、pH值、溶氧浓度等发酵条件的摸索,确定了最佳发酵条件：培养温度37℃,pH7.5,溶氧浓度30％。优化后的发酵体系使枯草芽孢杆菌YB1发酵液芽孢浓度从1.9×109cfu/mL提高到5.2×109cfu/mL,提高了2.8倍。 通过采用20m3发酵罐进行发酵培养枯草芽孢杆菌YBl验证实验室条件优化的发酵工艺,对菌YB1在液体发酵过程的菌体数量、芽孢数量、pH值随时间变化进行了观察,最终芽孢浓度稳定在4.5×109cfu/mL,验证了优化后的发酵体系是可行的。