DNA纳米结构的纯化和基于氧化石墨烯的生物传感器的研究

来源 :温州医学院 温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:best0909
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:   利用超速离心机,根据密度梯度离心法分离纯化DNA Origami/DNATetrahedron,期望通过该方法能够将DNA Origami/DNA Tetrahedron中的单体和聚体很好分开。   基于氧化石墨烯(GO)和奥曲肽(Octreotide)构建的纳米生物传感平台,进行简单、快速、灵敏的检测奥曲肽抗体和大鼠胰腺外分泌细胞,从而用于神经内分泌肿瘤的早期检测与诊断。   方法:   1.DNA Origami的分离纯化:以甘油为密度梯度介质,根据密度梯度离心法中的速率区带离心法分离纯化,离心完毕,人工取样分装收集离心管中所得到的离心液,然后用0.7%的琼脂糖凝胶电泳表征验证离心分离的效果。   2.DNA Tetrahedron的分离纯化:分别以甘油和蔗糖为密度梯度介质,根据密度梯度离心法之速率区带分离纯化DNA Tetrahedron,离心完毕,人工取样分装收集离心管中的所有离心样品,然后用10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳表征验证离心分离的效果。   3.基于氧化石墨烯(GO)和奥曲肽(Octreotide)构建的纳米传感平台快速、灵敏地检测奥曲肽抗体和神经内分泌肿瘤细胞:利用奥曲肽(Octreotide)能够可以和奥曲肽抗体高选择性,高亲和性,特异性结合的特点,GO独特的淬灭效应以及GO,奥曲肽,奥曲肽抗体三者之间相互作用的差异,建立一种简单快速的检测奥曲肽抗体的方法。GO能够吸附荧光标记的奥曲肽并导致其荧光淬灭,从而得到低荧光的复合物,而奥曲肽抗体可以和奥曲肽选择性,特异性结合,从而使其远离GO表面,荧光值得以恢复。另外,我们用大鼠胰腺外分泌细胞(AR42J)代替奥曲肽抗体,进一步研究该传感器在临床肿瘤检测方面的应用价值,该细胞是一种神经内分泌肿瘤细胞,其细胞膜表面过量表达生长抑素受体-2,而奥曲肽可以和生长抑素受体-2高选择性、高特异性、高亲和性结合,同时用一种细胞膜表面不表达该受体的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)做对照,基于上述同样的原理,我们建立了一种简单、快速、灵敏地检测神经内分泌肿瘤细胞的方法。   结果:   1.DNA Origami的分离纯化:我们共分离纯化了两种构型的DNA Origami方块,对于方块1而言,从0.7%的琼脂糖凝胶电泳结果发现:单链,单体,聚体能够很好地分开;而对于方块2,用0.7%的琼脂糖凝胶电泳图上,其单体和聚体都是成弥散状分布没有分开.不管改变什么离心参数之后,其单体和聚体始终黏在一起,整体迁移没有分离效果。   2.DNA Tetrahedron的分离纯化:从10%聚丙烯酰胺凝胶电泳结果发现,DNA Tetrahedron的单体和聚体始终黏在一起分布于离心管的上部,没有分开,也没有分离的趋势。   3.基于氧化石墨烯(GO)和奥曲肽(Octreotide)构建的纳米传感平台快速、灵敏地检测奥曲肽抗体和检测神经内分泌肿瘤细胞:GO,奥曲肽以及奥曲肽抗体之间相互作用的差异,GO能够吸附荧光标记的奥曲肽的荧光并使其荧光淬灭从而得到低荧光的复合物,当加入奥曲肽抗体后,荧光值恢复,用该方法可以检测到低至2 ng/mL的奥曲肽抗体,灵敏度高、选择性强、重现性好。与此同时我们用大鼠胰腺外分泌细胞(AR42J)代替奥曲肽抗体,用Zeiss荧光显微镜成像观察AR42J细胞膜表面很强的荧光,而CHO细胞膜表面虽然也有部分荧光现象,但其荧光强度明显弱于AR42J细胞。推测可能是因非特异性吸附引起的。当加入GO之后,结果发现,AR42J细胞依然表现很强的荧光,但其荧光强度较弱于未加GO组,而CHO细胞因为细胞膜表面不表达生长抑素受体-2,没有与奥曲肽特异性结合物质,在实验洗涤过程中被洗掉,其荧光显著降低,几乎没有荧光信号,证明了该方法的特异性。   结论:   本论文成功地将具有沉降系数差异的DNA Origami的中的单体和聚体很好的分开,为DNA Origami的进一步研究应用奠定了很好的基础;另外,成功构建了基于氧化石墨烯和奥曲肽的纳米生物传感平台,能够简单、快速、灵敏地检测奥曲肽抗体和大鼠胰腺外分泌细胞,在临床实际工作中有着潜在地应用价值,可以为临床肿瘤患者带来福音,也是医学研究领域的一个新的突破。  
其他文献
目的:观察抗CD20单克隆抗体联合腺病毒介导的IL-10基因对发病早期非肥胖性糖尿病鼠(NOD)肝脏细胞Sox9、Ngn3、Hes1基因表达的情况。方法:选择17-19周龄新诊断1型糖尿病(T1D)N
阐述了反求工程在快速原形技术中的重要作用;分析了目前反求工程中的关键技术:数字化技术;论证了目前自由曲面重构中的两种重要方案:矩形域曲面重构、三角域曲面重构;给出了具体工
介绍了第二尾矿库排洪主隧洞工程爆破具体施工情况,对该实验进行深入研究。为了获得高质量的爆破效果,应该做好最小抵抗线控制工作,也应该做好填塞质量。这是进行爆破之关键,
协调调度是保证智能机器人系统有效完成工作的关键.本文针对自主式移动机器人的系统结构,利用Petri网建立了同步和异步两种流水线模型,并分析了各自的特点和性能:同步流水线模型适用于
日前,被人们俗称宫颈癌疫苗的HPV疫苗获批在中国上市,那么别的癌症是否也有疫苗呢?事实上,针对宫颈癌的HPV疫苗、针对胃癌的HP疫苗以及用于部分预防肝癌的HBV疫苗,都不是真正
目的:观察在缺氧条件下进行枸杞多糖干预后肺血管平滑肌细胞中沉默接合型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达。方法:
本文以大庆石化公司水气厂空分装置高压电动机差动保护方式为例,将纵联差动保护和自平衡差动保护相比较,结果表明自平衡差动保护接线比较简单,灵敏性和可靠性较高,使用效果比
桥梁作为公路建设的重要组成部分,是决定线路运输力的重要建筑物。公路桥梁施工中采用预应力技术,能够有效提高桥梁的承载能力和使用寿命。本文首先公路桥梁预应力技术特点,
目的:探讨多层螺旋CT肺灌注成像在肺肿瘤诊断中的临床应用价值。方法:2013年1月-2015年1月期间,选取肺肿瘤患者86例对其行多层螺旋CT肺灌注成像检查。在确诊肿瘤性质以后,将
20世纪50年代的院系调整是我国高等教育史上的大事件,对我国现有高等教育格局产生了重大的影响。从院系调整时间段划分、院系调整的原因分析及对院系调整结果评价分析三个方面