研究背景与目的:心搏骤停是最常见的临床急危重症之一,心肺脑复苏作为其有效的救治手段,一直在不断的改进,但心搏骤停患者的预后并未得到显著的改善。心搏骤停心肺复苏后的幸存者普遍存在不同程度的神经功能障碍。众所周知,炎症反应在脑缺血/再灌注损伤过程中扮演着至关重要的角色。然而,心搏骤停心肺复苏后全身缺血/再灌注损伤过程中,脑缺血/再灌注损伤所致的炎症反应机制尚不明确。细胞焦亡作为一种程序性死亡方式,已成为近年来研究的热点。本研究旨在探讨NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡在心搏骤停心肺复苏后脑缺血/再灌注损伤过程中的作用及相关机制。方法:1.采用C57BL/6小鼠和NLRP3^-/-小鼠制备高钾合并窒息心搏骤停心肺复苏模型,根据复苏后取材时间点的不同,将这两种品系的小鼠分别分为复苏前组、复苏后2h组、复苏后12h组和复苏后24h组。评估这两种小鼠的总体复苏情况,并记录各组小鼠的神经功能评分。通过免疫印迹法（Western blot,WB）检测脑组织中NLRP3、炎性Caspase-1、细胞焦亡的执行蛋白GSDMD的表达。应用免疫荧光观察复苏后不同时间点海马回区NLRP3和GSDMD的表达趋势和定位。2.培养人脑胶质瘤细胞U87细胞,用NLRP3 RNAi慢病毒和空载慢病毒分别感染U87细胞,并用嘌呤霉素进行筛选,得到U87 NLRP3 RNAi和U87空载的稳定细胞系。接着,对正常U87细胞、U87 NLRP3 RNAi细胞以及U87空载细胞进行糖氧剥夺12h/复氧12h。最后,倒置显微镜下观察各组细胞的细胞形态,用WB检测细胞焦亡相关蛋白的表达,用CCK8试剂检测各组U87细胞的细胞活力,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组U87细胞上清液中IL-1β的浓度。结果:1.与C57BL/6小鼠相比,NLRP3^-/-小鼠心搏骤停心肺复苏后的自主循环恢复率、自主呼吸恢复率和2小时存活率均显著提高（P<0.05）,而其自主循环恢复时间和自主呼吸恢复时间均显著缩短（P<0.05）。此外,NLRP3^-/-小鼠复苏后2h、复苏后6h、复苏后12h和复苏后24h的神经功能评分均分别高于C57BL/6小鼠复苏后2h、复苏后6h、复苏后12h和复苏后24h的,差异具有统计学意义（P<0.05）。2.C57BL/6小鼠和NLRP3^-/-小鼠在心搏骤停心肺复苏后脑缺血/再灌注损伤过程中都发生了细胞焦亡。C57BL/6小鼠脑组织中NLRP3蛋白、Caspase-1蛋白以及细胞焦亡的执行蛋白GSDMD的表达在复苏后6h达到高峰,随后逐步降低,在复苏后24h仍未恢复至基线水平（P<0.001）;与复苏后同时间段的C57BL/6小鼠相比,NLRP3^-/-小鼠在心搏骤停心肺复苏后脑缺血/再灌注损伤过程中,脑组织中NLRP3蛋白不表达,其下游的Caspase-1蛋白和GSDMD蛋白呈显著低表达（P<0.001）。3.NLRP3蛋白表达定位于海马回区细胞质,GSDMD蛋白表达定位于海马回区细胞膜。4.正常U87细胞在糖氧剥夺12h/复氧12h后,细胞形态明显发生改变,细胞贴壁能力和细胞活力均显著降低,而NLRP3、炎性Caspase-1和GSDMD蛋白的表达水平会显著上调（P<0.001）,并产生大量的炎性因子IL-1β（P<0.001）;U87 NLRP3 RNAi稳定细胞经过糖氧剥夺12h/复氧12h处理后,细胞形态明显改善,细胞贴壁能力和细胞活力均显著增强,而NLRP3、炎性Caspase-1和GSDMD蛋白的表达水平均显著降低（P<0.001）,产生的炎性因子IL-1β也明显减少（P<0.001）。结论:（1）NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡在心肺复苏后海马回区缺血/再灌注损伤过程中扮演着重要的角色;（2）沉默或者敲低NLRP3基因可抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD这条介导细胞焦亡信号轴的激活,改善细胞形态、增强细胞贴壁能力和细胞活力、降低炎性因子水平,继而显著提高小鼠心肺复苏后2h存活率、自主循环恢复率、自主呼吸恢复率,显著缩短心肺复苏后自主循环恢复时间和自主呼吸恢复时间,显著改善小鼠心肺复苏后的神经功能评分