微波固相合成葡—半乳低聚糖及其抗氧化和免疫活性研究

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葡-半乳低聚糖具有促进肠道内双歧杆菌、乳酸菌增殖,改善矿物质的吸收,降低血脂、胆固醇等功能,这些功能与清除自由基、增强机体抗氧化有关。在低聚糖的合成方法中微波固相合成技术,具有反应速度快、合成产率高、合成过程清洁无污染等优点。因此,本文以乳糖为原料,采用微波固相合成法合成葡-半乳低聚糖,并对其功能性进行研究。首先对微波固相合成葡-半乳低聚糖的反应条件进行优化,经过单因素实验和正交实验最终得出合成低聚糖的最适反应条件为:微波功率1000W,微波处理时间3min,引发剂水的添加量20%,催化剂添加量为3.5%,乳糖转化率为82.71%。产物低聚糖经薄层色谱及高效液相色谱(80℃糖柱)分析,得出产物主要组成依次为:半乳糖占1.2%,葡萄糖占2.70%,乳糖占22.38%,三糖占6.99%,四糖占5.06%,五糖及其以上占61.67%。其次研究了葡-半乳低聚糖体外清除自由基活性,结果表明,高、中、低三种聚合度的葡-半乳低聚糖均可有效清除DPPH自由基和羟自由基(·OH)。其中高聚合度葡-半乳低聚糖对DPPH自由基的清除能力较中、低聚合度葡-半乳低聚糖强,IC50为13 mg/mL;而对羟自由基(·OH)的清除能力,中聚合度葡-半乳低聚糖较强,其IC50为21 mg/mL。动物实验研究实验表明,葡-半乳低聚糖能够显著降低高脂小鼠血浆、肝脏、胰腺、胃、十二指肠、空肠、回肠的自由基水平(p<0.05);显著增强超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性(p<0.05),显著提高小鼠总抗氧化能力(T-AOC)(p<0.05),显著降低脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平(p<0.05)。饲喂葡-半乳低聚糖能够显著降低高脂小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)含量(p<0.05),显著提高血清高密度脂蛋白(HDL)含量(p<0.05)。免疫实验研究表明,饲喂葡-半乳低聚糖的高脂小鼠脾脏指数显著增加(p<0.05);在ConA刺激下脾脏淋巴细胞转化率显著提高(p<0.05)。高剂量葡-半乳低聚糖能够显著增强高脂小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力(p<0.05)。本法合成的葡-半乳低聚糖可有效降低高脂饲喂小鼠体内自由基含量,调整血脂水平、增强体内抗氧化酶活性,提高小鼠的细胞免疫能力。
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