甜瓜细菌性果斑病菌菌株哈17A致病相关基因lysR的克隆

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甜瓜细菌性果斑病(Bacterial Fruit Blotch of Melon简称BFBM)是由燕麦嗜酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp. citrulli Willems et al ,1992)引起的一种病害,可以严重危害西、甜瓜的叶片和果实,造成西瓜和甜瓜的大量减产,是国际规定的检疫性植物病害之一。目前,对该病原菌致病机制的研究鲜有报道。本研究从遗传学角度初步研究了该病原微生物的致病相关基因,为进一步研究该病菌和宿主之间的互作提供了材料。哈17A菌株为甜瓜的致病菌株,分离自新疆罹病甜瓜叶片。本研究运用16SrDNA序列同源性分析、特异性引物PCR和全细胞脂肪酸分析的方法,将菌株哈17A鉴定为A. avenae subsp. citrulli,同时对其部分生物学特性也进行了初步分析。本研究利用三亲杂交的方法将带有抗卡那标记的Tn5转座子转入甜瓜果斑病菌哈17A的细胞中,转座子随机插入到哈17A基因组DNA上,获得突变体库。利用“叶片离体筛选法”筛选致病性减弱的突变体,从2000多个突变体中筛选到得到致病性明显减弱的突变体5个。其中,通过“鸟枪法”成功克隆到突变体W-46的Tn5侧翼序列。根据测序结果BLAST比对得知,该基因的产物与A. avenae subsp.citrulli AAC00-1中LysR家族的转录调控蛋白(LTTR) LysR的相似性达到100%,我们命名该基因为lysR。根据测序结果设计引物,扩增包含目标基因的一段序列,构建互补载体,对突变菌株W-46进行功能互补,得到了致病力恢复的互补菌株C-46,证明lysR基因与菌株哈17A的致病性密切相关。另外,lysR与哈17A菌株中其他致病性相关基因的关系有待进一步验证。本研究从传统的植物病理学入手,建立了筛选燕麦嗜酸菌致病菌株哈17A突变体的筛选体系――离体叶片筛选法,优化了研究燕麦嗜酸菌西瓜亚种致病性的遗传学实验方法,为燕麦嗜酸菌西瓜亚种的致病性分子遗传机制的研究提供了研究基础,具有重要的理论意义和潜在的应用价值。
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