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本论文以凡纳滨对虾、日本囊对虾和中华绒螯蟹为研究对象,研究了环境因子对甲壳动物血淋巴渗透压、离子含量和鳃丝Na+-K+-ATPase活力以及血细胞数量、酚氧化酶活力、抗菌和溶菌活力的影响,探讨了甲壳动物渗透调节和免疫调控的环境生理学机制,不仅揭示了甲壳动物对环境变化的生理适应和调控规律,而且在研究方法上也有所创新,为甲壳动物渗透与免疫生理学研究奠定了理论基础,也为甲壳动物健康养殖的水环境调控和病害防治提供了科学依据。 1 盐度、pH对凡纳滨对虾鳃丝Na+-K+-ATPase活力的影响 盐度、pH变化对凡纳滨对虾鳃丝Na+-K+-ATPase活力的影响显著(F>F0.01)。在盐度变化(30→5)3d内,各处理组鳃丝Na+-K+-ATPase活力随着处理时间的增加逐渐升高;至3-15d时,不同盐度下鳃丝Na+-K+-ATPase活力趋于稳定,与对照组相比酶活力明显升高(F>F0.05),而且盐度越低酶活力越大。在pH变化(7.0←8.0→9.5)3d内,各处理组鳃丝Na+-K+-ATPase活力随着处理时间的增加呈峰值变化,表现为向低pH和向高pH变化分别于9h和12h达到最大值,至3d时均恢复正常;在pH变化3-12d内,不同pH环境下鳃丝Na+-K+-ATPase活力无明显差异(F<F0.05)。 2 盐度对日本囊对虾仔虾生长和Na+-K+-ATPase活力的影响 盐度对日本囊对虾仔虾存活率、增重量和Na+-K+-ATPase活力的影响显著(P<0.05)。随着向低盐度变化的增加,仔虾的存活率和增重量明显下降,而向高盐度变化无显著差异;在盐度变化48h内,随着盐度变化的增加,仔虾Na+-K+-ATPase活力变化增大,各处理组仔虾Na+-K+-ATPase活力随着取样时间的增加呈峰值变化,至24h时低盐度处理组酶活力达到最大值,而高盐度处理组达到最小值;至48-72h时,不同盐度下仔虾Na+-K+-ATPase活力趋于稳定,而且盐环境因子对甲壳动物渗透调节与免疫力的影响度越低酶活力越大。实验证明日本囊对虾仔虾在低盐度地下卤水中的适宜盐度应为20一24。3盐度对中华绒鳌蟹渗透调节的影响 中华绒鳌蟹血淋巴渗透压、Na+浓度随外界盐度升高而显著升高:血淋巴蛋白浓度随外界盐度升高而降低,但不显著;鳃上皮Na+一K+一ATPase的活力也随外界盐度升高显著降低,并且与血淋巴和外环境的Na+浓度差成正相关。同时盐度对各指标影响的时间并不一致,盐度作用3h后血淋巴渗透压和血淋巴Na+浓度开始上升,而血淋巴总蛋白浓度和鳃上皮Na+一K+一ATPase活力在6h时出现下降,至3一15d各指标趋于稳定。4 pH对中华绒鳌蟹渗透调节的影响 研究了不同pH(4 .5、5.5、6.5、7.5、8.5、9.5)对中华绒鳌蟹渗透调节的影响。结果表明:pH为4.5和5.5的低PH水环境随着时间的延长中华绒鳌蟹血淋巴渗透压和Na’离子浓度、鳃上皮Na+一K’一ATPase活力显著降低,血淋巴K+离子浓度则明显升高;在实验时间内,pH为6.5、7.5和9.5的水环境及对照组中华绒鳌蟹血淋巴渗透压和血淋巴离子浓度、鳃上皮Na’一K+一ATPase活力无显著变化。5重金属离子对中华绒鳌蟹鳃丝Na+一reeATPase活性的影响 3种重金属离子各处理组中华绒鳌蟹鳃丝Na+一K+一ATPase活力分别随取样时间的变化显著(乃0.05),表现出明显的剂量、时间效应关系。同时在重金属离子作用下,鳃丝Na+一K+一ATPase活力在24h时下降幅度较大,24h后Na+一K+一ATPase活力下降缓慢,而且在同一取样时间各处理组鳃丝Na+一K+一ATPase活力差异显著 (代0.05)。3种重金属离子对鳃丝Na+一K+一ATPase活性的毒性大小依次为:CdZ‘)CuZ’>Zn,‘。6盐度、pH对凡纳滨对虾免疫力的影响 盐度(30一5)、PH(8 .0一7.0和9.5)变化对凡纳滨对虾血细胞数量、血淋巴中酚氧化酶活力、溶菌和抗菌活力影响显著(F>FO.。l),且随着盐度、pH变化的增加各免疫指标变化增大。在盐度变化6d内,凡纳滨对虾血淋巴中酚氧化酶活力、溶菌和抗菌活力随着时间的增加呈现峰值变化,至12h时酚氧化酶活力达到环境因子对甲壳动物渗透调节与免疫力的影响最大值,抗菌活力和溶菌活力达到最低值,至6d时均恢复正常,而血细胞数量则逐渐降低;盐度变化6一1 sd,不同盐度下血细胞数量趋于稳定,且盐度越低血细胞数量越少,而血淋巴中酚氧化酶活力、溶菌和抗菌活力无明显差异(F<F0‘)5)。在pH变化3d内,除pH为8.5处理组外,各pH处理组血细胞数量、抗菌活力随着时间的增加逐渐降低,而酚氧化酶活力和溶菌活力呈峰值变化,至12h时酚氧化酶活力达到最大值,溶菌活力达到最小值:在PH变化3一12d内,各pH处理组的免疫指标趋于稳定,血细胞数量、血淋巴中溶菌活力和抗菌活力与对照组相比明显降低,而酚氧化酶活力明显升高(F>氏.,。)。7溶解氧对凡纳滨对虾免疫力的影响 溶解氧变化对凡纳滨对虾血细胞数量、血淋巴中酚氧化酶活力、溶菌和抗菌活力影响显著(F>氏.fJ。),且随着溶解氧含量的降低,凡纳滨对虾血细胞数量、血淋巴中溶菌和抗菌活力逐渐减少,酚氧化酶活力逐渐升高。在实验时间内,对照组和Do为5.smg/L实验组血细胞数量和血淋巴中各免疫指标变化不明显,而低溶解氧组(Do=3.5、2.Omg/L)血细胞数量呈明显下?