氯噻淋是南通江山农药化工股份有限公司研发的一种高效、低毒、广谱的新烟碱类杀虫剂,广泛用于控制烟粉虱、蓟马、蚜虫、叶蝉和其他植食性害虫。高效液相色谱法(HPLC)是常见的氯噻啉检测方法,然而仪器检测存在设备昂贵、有机溶剂使用量大、操作程序复杂和难以实现高通量检测等问题。本研究建立了基于氯噻淋单克隆抗体的荧光偏振免疫分析方法(FPIA)、时间分辨荧光免疫分析方法(TRFIA)、量子点荧光免疫分析方法(FLISA)和增敏型金标试纸条免疫层析分析方法(Enhanced-GICA),并且应用于农产品和环境样品中氯噻啉的快速检测。基于氯噻淋单克隆抗体(MAb)建立了时间分辨荧光免疫分析方法(TRFIA),并对包被抗原、铕标抗体的工作浓度和工作缓冲液进行了优化。在最优条件下,标准曲线的抑制中浓度(IC50)和最低检测限(IC1o)分别为9.37 ng/mL和0.024 ng/mL。建立的TRFIA仅对吡虫啉有较大交叉反应(36.05%),其他结构类似物的交叉反应率均小于0.2%,表明建立的TRFIA对氯噻啉具有较高的特异性。在番茄、梨、大米、甘蓝、黄瓜、苹果和河水中的平均添加回收率在81.3%-117.7%之间,相对标准偏差在1.2%-6.9%之间。TRFIA法检测未知样品中氯噻啉残留的结果与HPLC的检测结果具有高度相关性,水样品和梨样品中的相关系数(R2)分别0.9920和0.9699。建立的氯噻淋TRFIA法比基于同种抗体的FPIA法灵敏度提高了 9倍,可以作为农产品中氯噻啉残留检测的一种理想分析工具。利用氯噻啉单克隆抗体建立了氯噻啉量子点荧光免疫分析方法(FLISA),并对包被抗原、QD标记抗体的工作浓度和工作缓冲液进行了优化。在最优条件下,标准曲线的抑制中浓度(IC50)和最低检测限(IC10)分别为23.63 ng/mL和0.45 ng/mL。建立的FLISA仅对吡虫啉有较大交叉反应(33.53%),其他结构类似物的交叉反应率均小于0.2%,表明建立的FLISA对氯噻啉具有较高的特异性。在番茄、梨、大米、甘蓝、黄瓜、苹果和河水中的平均添加回收率在72.7%-117.6%之间,相对标准偏差在2.4%-13.5%之间。FLISA法检测未知样品中氯漆啉残留的结果与HPLC的检测结果具有高度相关性,水样品和梨样品中的相关系数(R2)分别0.9806和0.9979。本研究建立的FLISA法具有灵敏、准确的特点,能够应用于农产品和环境样品中氯噻淋的高通量检测。利用氯噻啉单克隆抗体建立了荧光偏振免疫分析方法(FPIA),并对荧光示踪物、抗体的工作浓度和工作缓冲液进行了优化。在最优条件下,标准曲线的抑制中浓度(IC50)和最低检测限(IC10)分别为87.94 ng/mL和0.57 ng/mL。建立的FPIA仅对吡虫啉有较大交叉反应(96.87%),表明建立的FPIA对氯噻啉具有较高的特异性。在番茄、梨、大米、甘蓝、黄瓜、苹果和河水中的平均添加回收率在83.3%-117.3%之间,相对标准偏差在5.4%-12.0%之间。FPIA法检测未知样品中氯噻啉残留的结果与HPLC的检测结果具有高度相关性,相关系数(R2)为0.9942,证明本研究建立的FPIA方法具有较高的可靠性与准确性,可用于农产品和环境样品中氯噻淋快速检测。基于单克隆抗体和生物素-链霉亲和素的高亲和作用,建立了增敏型氯噻淋金标试纸条免疫层析分析方法(GICA)。在最佳优化条件下,可以在10分钟内实现可视化判读,最低检测限为50ng/mL。建立的GICA方法除了对吡虫啉有较大交叉反应外,与其他类似化合物基本无交叉反应。研究中,使用GICA法检测对不同种类的样品进行了基质效应评价,获得了不同基质效应消除的最佳稀释倍数。通过在空白样品中添加不同浓度的氯噻淋标样进行添加回收实验,结果显示GICA法具有很高的准确度。GICA法检测未知样品中氯噻啉残留的结果与HPLC的检测结果一致,表明建立的增强GICA具有简单、快速、灵敏度高的特点,可以用于农产品和环境样品中氯噻啉残留的定性和半定量检测。