本人所在课题组的前期研究发现,四聚体红色荧光蛋白(tfRFP)可同时诱导机体产生体液免疫和细胞免疫应答,是一种性能优良的荧光模型抗原。在tfRFP免疫小鼠体内接种表达tfRFP的黑色素瘤细胞(tfRFP-B16)后,肿瘤微环境内大量的免疫细胞募集,肿瘤细胞被破坏,产生大量的tfRFP阳性微粒,肿瘤生长被控制。这种产生微粒的现象在PBS处理的对照组小鼠体内并未出现,很可能在肿瘤的免疫监视与控制中有着独特的意义。在这个过程中,免疫细胞如何作用于肿瘤细胞诱导其死亡并产生大量微粒,值得我们进一步研究。对此,我们推测是免疫细胞通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)引起细胞的死亡而诱导了这种微粒的释放。本论文是为配合课题组对tfRFP诱导的特异性免疫应答活体成像研究,在体外实验条件下模拟体内环境,确证诱导肿瘤细胞产生微粒的必要条件,以印证活体观察到的现象和推测的诱因。主要包括以下方面:(1)免疫细胞攻击肿瘤细胞产生的微粒展示及其体外分离。以我们课题组已建立荧光蛋白抗原模型体系为研究对象,切片成像观察tfRFP蛋白免疫小鼠的肿瘤组织内肿瘤细胞情况,同时尝试体外分离微粒,相对于PBS组小鼠肿瘤组织分离出的肿瘤细胞,免疫小鼠的肿瘤组织未分离出完整的细胞,而是包裹着很多微粒的团块。(2)免疫细胞攻击tfRFP-B16细胞产生微粒的体外成像及机理研究。tfRFP-B16细胞、小鼠血清和小鼠骨髓细胞共孵育后,转盘共聚焦成像观察tfRFP-B16细胞形态变化以及MTS检测tfRFP-B16肿瘤细胞的存活率,实验结果显示,只有当免疫小鼠血清和小鼠骨髓细胞同时作用于tfRFP-B16细胞时,才能诱导肿瘤细胞的死亡并产生微粒。由此证明,ADCC是介导tfRFP免疫小鼠体内tfRFP-B16肿瘤细胞死亡和微粒释放的重要作用机制之一。