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目的:
研究ing 4和fp248的表达与消化道肿瘤和白血病的关系,为消化道肿瘤和白血病的诊断寻找新的指标。
方法:
采用RT-PCR和real-time RT-PCR技术研究细胞株((成人骨髓间质干细胞(hBM-MSC)、胃腺癌细胞株(SGC-7901)、结肠腺癌细胞株(SW480)、髓系白血病细胞株(U937)等)和白血病患者骨髓或外周血以及胃癌等部分肿瘤组织中ing4和FP248基因表达水平;采用RT-PCR和巢式PCR(nested RT-PCR)技术检测消化道肿瘤患者外周血单个核细胞中ing4和fp248基因表达,并采用巢式PCR扩增ALL、AML、CML白血病标本中ING4的第四和第五外显子接头附近cDNA和基因组DNA,并对其产物进行测序;采用Western blot技术和免疫组织化学(immunohistochemistry)技术研究消化道肿瘤组织、白血病患者骨髓或外周血中ING4蛋白质表达水平;采用Western印迹技术研究白血病患者骨髓或外周血中ING4的蛋质表达水平。
结果:
ING4基因在SGC、SW480、PC3细胞株中未见表达,在hBM-MMSC中表达较弱,ALL、AML、CML白血病患者骨髓及外周血中ING4的表达均低于健康对照组,76.6%(23/30)胃癌组织、83.3%(5/6)直肠癌组织、100%(7/7)结肠癌组织中ing4基因表达下调,分化较好的癌组织中ing4基因表达水平高于分化较差的癌组织,两年内复发的胃癌、结肠癌和直肠癌患者癌组织中ing4基因表达水平低于未复发者;在食道癌组织中未能检测到ing4表达,但在癌旁组织中呈阳性。在白血病骨髓单个核细胞中未发现ing4基因第4和第5外显子接头处突变。Western blot结果显示,ING4在ALL、AML、CML白血病患者骨髓和外周血以及胃癌、结肠癌、直肠癌、食道癌中含量较低,免疫组织化学结果显示,胃癌组织中ING4表达低于癌旁组织。采用RT-PCR研究ing4基因在结肠癌、直肠癌和胃癌患者外周血单个核细胞中表达水平,结果患者未见阳性表达,而健康对照组中ing4基因呈阳性。SGC细胞株高表达FP248基因,但A549和PLA801-95D细胞株中fp248基因表达水平很低,U937和SW480细胞株中fp248基因未见表达;RT-PCR和real-time RT-PCR结果显示,ALL、AML、CML白血病患者骨髓及外周血中FP248基因的表达水平高于健康对照组,83.3%(25/30)的胃癌组织、100%(6/6)的直肠癌组织、85.7%(6/7)结肠癌组织中FP248基因的表达高于癌旁组织,表达水平与癌组织分化程度及患者预后显著相关。胃癌、结肠癌、直肠癌患者手术前外周血单个核细胞中FP248基因阳性率分别为66.7%、71.4%和100%,手术l周后阳性率分别为80%、85.7%和100%,根据nested RT-PCR结果将患者分成两组:阳性组和阴性组,阳性组复发率高于阴性组。
结论:
ing4基因和fp248基因可能与消化道肿瘤和白血病的发生发展以及患者预后有着紧密的联系,这为肿瘤的基因治疗和基因诊断提供了一个新的途径和指标。在食道癌组织中没有检测到ing4和fp248 mRNA的表达,这值得关注。在外周血中存在ing4基因表达缺陷的病人对该类肿瘤可能有易感性,外周血单个核细胞fp248基因表达检测可能会成为肿瘤基因诊断和预后判断的参考指标。