【摘 要】
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microRNA(miRNA)是一类约22m的内源性非编码单链RNA分子,它广泛存在于病毒、动物和植物等多种生物体中,通过与靶基因3’UTR区结合,使得靶mRNA翻译抑制或降解,从而对基因的表
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microRNA(miRNA)是一类约22m的内源性非编码单链RNA分子,它广泛存在于病毒、动物和植物等多种生物体中,通过与靶基因3’UTR区结合,使得靶mRNA翻译抑制或降解,从而对基因的表达起负性调节作用,是基因表达的重要调控因子。SCD1是位于内质网上的一类催化酶,是肝细胞合成单不饱和脂肪酸的限速酶,能够将软脂酰和硬脂酰辅酶A分别转化成棕榈油酸和油酸,这些不饱和脂肪酸是合成各种脂类包括甘油三酯、磷脂、胆固醇、蜡酯以及甘油二酯的重要底物。SCD1在肝脏的脂质代谢中,即在脂肪合成与脂肪酸氧化中,都发挥着举足轻重的作用,本实验对朗德鹅肝脏SCD1基因的表达及其调控1niRNA进行筛选研究。主要实验结果如下:(1)填饲过程中,朗德鹅的肝脏重量和肝体比随着填饲时间的延长逐渐增加,70日龄(填饲0天)时肝脏的平均重量为124.5g,89日龄(填饲19天)时肝脏平均重量上升为826.6g;70日龄时平均肝体比为3.21%,89日龄时,平均肝体比达10.30%。本实验采用荧光定量PCR测定朗德鹅SCD1基因在填饲各阶段和对照组各阶段表达量变化趋势,结果显示填饲组各阶段表达量均高于对照组,且填饲19天(89日龄)时,填饲组表达量极显著高于对照组;测定填饲组各时期棕榈油酸、油酸、甘油三酯和胆固醇含量,并分析填饲组各阶段SCD1基因与各指标之间的相关性,SCD1基因表达量与油酸、胆固醇、VLDL极显著正相关(P<0.01),与甘油三酯含量显著正相关(P<0.05)。(2)通过软件预测结合前期小RNA测序结果,筛选出调控鹅SCD1基因的]miRNA为miR-30b, miR-30a-5p和miR-10b,利用SYBR Green染料法荧光定量PCR测定各miRNA在填饲组各时期与对照组各时期表达量变化情况,对照组表达量均高于填饲组,与SCD1基因的表达变化情况相反。(3)从朗德鹅中扩增出鹅miR-30b和]miR-30a-5p前体序列,经测序,与鸡的miR-30b和miR-30a-5p前体同源性都达到100%。利用双荧光素酶报告系统在CHO细胞系中验证所筛选的3个miRNA,结果显示miR30b与miR-30a-5p为调控鹅SCD1基因的miRNA。揭示miR-30b和miR-30a-5p可能通过对SCD1基因的调节作用影响鹅肝脏脂代谢过程。
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