【摘 要】
：
辣根过氧化物酶(HRP)是一种含血红素的糖蛋白,由于其广泛的底物特异性以及高催化活性和稳定性,通常作为标记酶用于各种检测反应。比如,HRP经常用于生物和免疫传感器,化学发光,荧光和电化学检测系统以及具有比色检测功能的DNA和蛋白质微芯片。本论文的研究目标是:亚克隆本实验室早先设计合成的HRP基因至酵母组成性和诱导性表达载体中;遗传转化毕赤酵母并获得阳性转化株;分析HRP基因在转基因酵母株中的表达状
论文部分内容阅读
辣根过氧化物酶(HRP)是一种含血红素的糖蛋白,由于其广泛的底物特异性以及高催化活性和稳定性,通常作为标记酶用于各种检测反应。比如,HRP经常用于生物和免疫传感器,化学发光,荧光和电化学检测系统以及具有比色检测功能的DNA和蛋白质微芯片。本论文的研究目标是:亚克隆本实验室早先设计合成的HRP基因至酵母组成性和诱导性表达载体中;遗传转化毕赤酵母并获得阳性转化株;分析HRP基因在转基因酵母株中的表达状况。以下为本论文的研究结果:(1)设计了PCR扩增引物P1、P2和P3,在适当条件下通过PCR反应扩增了HRP基因。扩增产物经酶切后琼脂糖凝胶电泳纯化、回收后用于连接反应。(2)相应限制酶消化组成型和诱导型表达载体p GAPZαA和p PIC9K,与上述HRP的PCR产物进行连接,遗传转化大肠杆菌E.coli DH5α。(3)通过菌落PCR验证阳性转化子,挑取阳性转化子进行DNA测序核实。测序结果证实HRP基因序列正确并与p GAPZαA-HRP和p PIC9K-His-HRP载体的表达阅读框一致。(4)通过电击法将表达载体p GAPZαA-HRP和p PIC9K-His-HRP遗传转化至毕赤酵母菌GS115宿主细胞中,以获得转HRP基因酵母菌株。分别以Zeocin筛选p GAPZαA遗传转化的酵母菌株、以遗传霉素筛选p PIC9K遗传转化的酵母菌株,对抗性酵母菌落进一步进行菌落PCR验证,最终获得了多株HRP转入毕赤酵母菌的转基因菌株。(5)挑取转HRP基因菌株(10)培养和诱导,以SDS-PAGE分析转基因菌株的细胞裂解液和上清液,结果表明,转基因菌株出现了一条分子量约为64k Da和63k Da的新蛋白带,该带与理论分子量(65k Da和63k Da)基本一致。说明HRP基因得以在转基因毕赤酵母菌中表达。
其他文献
近年来,我国经济取得了世界瞩目的成就,经济增速位列世界前茅。在这伟大成就的背后,电力资源的稳定供给发挥了很大的作用。如今,世界已经步入信息时代,然而,电气依然是国民经
就现在来看,我国环境问题日益突显,尤其是土壤污染的环境现状,是社会经济发展的重大阻碍因素,成为坚持可持续发展的巨大挑战。我国学界对于这个现状也已经有了深刻的认识,学
信息技术发展日新月异,网络大数据正无处不在的影响着人们的生活。基于位置的服务已经覆盖了各种智能设备的应用,而终端位置数据则成为了提供服务的基础信息。位置数据除了技术应用价值之外,还蕴含着商业价值,监管价值和安全价值等等。目前基于卫星的室外定位技术已发展多年,有丰富的应用场景积累,较为成熟。而,根据美国环境保护署的数据显示,目前人类在室内活动的时间占比高达87%。因此,在定位技术领域内,室内定位技术
布渣叶(Microcos Folium)是岭南药食两用植物,是传统中药复方与中草药凉茶的主要原料之一。在报道的布渣叶所含化学成分中,黄酮类成分是布渣叶的主要活性成分。目前,尚未有相关报道对布渣叶总黄酮进行定性定量分析及药效机制研究。目的:本研究旨在将布渣叶总黄酮提取物(Microcos Folium flavonoids extracts,MFFE)进行定性定量分析,以MFFE为受试药,探究其对对
近年来,随着新疆地区公路建设的持续发展,大部分沥青路面已经有十五年以上的使用年限。沥青路面作为各等级公路的基本路面结构,对其进行有效、环保的养护维修是一项重要的工作。与此同时,目前我国迫切需要解决对各种资源短缺和环境压力较大的问题。在建设中充分利用再生资源,建设环境友好型社会,是我国交通建设邻域可持续发展的两个重要方向。新疆地区地处中国内陆,地域辽阔、公路里程长、气候条件复杂,再生技术相对落后。随
BIM技术在我国的发展日益成熟,以及随着商业综合体设计的日趋复杂,BIM技术在商业综合体设计阶段的应用程度进一步提高,在实际应用中产生的价值也越来越大,如何评价及提升BIM技术在商业综合体设计阶段的应用价值也成为一个重要的研究课题。本文选择商业综合体设计阶段的应用价值作为切入点,梳理BIM技术在商业综合体设计阶段的应用情况及国内外的发展现状。结合目前最先进的设计总包和BIM总发包两种应用模式的应用
凉山彝族自治州位于四川省西南部,亚热带季风气候,地形地貌复杂多样,草山草坡占地面积超过40%,为发展养羊生产提供了良好的生态条件。然而由于当地寄生虫防控力量薄弱,寄生虫病大大严重影响了当地羊只的生长繁殖,削弱了羊的生产性能,严重阻碍了当地养羊业的发展和凉山州经济效益的提升。为调查了解凉山州地区羊蠕虫感染情况,给当地蠕虫防治提供参考依据,本研究于2017年6月-7月在凉山州甘洛县、布拖县、西昌市、昭
在二语习得中,现代汉语比较句的否定式一直是一个重难点问题,使用率和偏误率都很高。鉴于此,本论文通过归纳分析北京大学中国语言研究中心CCL语料库的1500条例句,研究“不比”、“不如”和“没有”三种汉语否定比较句的在语法、语义和语用三个平面的特点。以此为基础,以哈萨克斯坦阿布赉汗国际关系与世界语言大学汉语学习者为研究对象,考察他们学习这三种汉语否定比较句时出现的偏误情况。研究主要采用文献阅读法和观察
游云南APP作为新媒体传播平台,在传播云南旅游新形象上具有独特价值。游云南APP是云南省人民政府与腾讯联合打造的中国首个省级全域旅游智慧化平台,游云南APP在发展过程中,将“输出云南旅游新形象”作为传播目标。美国学者皮尔斯提出了“三元传播模式”,认为可以通过“再现体”“对象”和“解释项”三者间的关系来探究内容传播的意义所在,在发送者与解释者的传播过程中,要突出解释者的重要性,实现双方获得“共同解释
在生物体内存在可催化多步连续反应的通用酶,对生物代谢过程具有重要作用。八氢番茄红素脱氢酶CrtI作为典型代表,可以催化多步连续脱氢反应,生成番茄红素等具有重要价值的产物。本文主要探索调控CrtI多步脱氢功能的关键位点及其相关结构的进化规律。本研究以催化四步脱氢反应的三孢布拉霉(Blakeslea trispora)来源的CrtI(BtCrtI)为研究对象。首先,通过理性设计,探索催化活性位点的结构