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目的:本课题对丁氏妇科治疗高龄备孕月经过少的“五子调经方”进行药效学实验研究,通过探讨五子调经方的药物对初老大鼠的内分泌激素、子宫内膜、子宫卵巢脏器系数、内膜容受性的影响,为五子调经方的临床有效性提供理论和实验依据。
方法:选用10-12月龄雌性大鼠,动情期延长为初老大鼠模型共55只,将其随机分为五子调经方低剂量组、五子调经方中剂量、五子调经方高剂量组、模型组对照组、乌鸡白凤丸阳性对照组;另设3-4月龄SD大鼠为青年空白对照组9只。各组连续给药20天后,观察各组大鼠的一般情况、子宫及卵巢脏器系数;采用HE染色法观察子宫内膜形态及厚度;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中E2、P、LH、FSH、AMH的浓度;采用实时定量基因扩增荧光检测方法(Real-time qPCR)检测大鼠子宫内膜容受因子整合素β3及EMX2基因的表达。
结果:1.一般情况:青年组、模型组大鼠予以生理盐水灌胃前后,一般情况无变化。给药组灌胃治疗后症状均有不同程度的改善,精神尚可,活动增加,毛发脱落较前少且有一定光泽。2.子宫、卵巢脏器系数观察:(1)大鼠子宫脏器系数:青年组子宫脏器系数高于模型组(P<0.05):与模型组比较,五子调经方高剂量组子宫脏器系数提高,差异有统计学意义(P<0.05),五子调经方中、低剂量组子宫脏器系数提高,差异无统计学意义(P>O.05);高剂量组与白凤丸组脏器指数比较,差异无统计学意义(P>O.05)。(2)卵巢脏器系数:青年组卵巢脏器系数高于模型组(P<0.05):与模型组比较,白凤丸组、五子调经方高、中剂量组卵巢脏器系数升高,差异有统计学意义(P<0.05),五子调经方低剂量组较模型组升高,差异无统计学意义(P>0.05);高剂量组卵巢脏器指数较低剂量组高,差异有统计学意义(P<0.05),中剂量组与高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.子宫内膜形态及厚度:(1)内膜形态方面,模型组子宫内膜薄,腺上皮细胞形态欠饱满、结构无序,腺体及血管数量较少;各给药组大鼠的腺上皮细胞柱状整齐饱满、腺体及血管数量较模型组均有增加。(2)内膜厚度方面,青年组子宫内膜厚度高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,白凤丸组、各治疗组内膜均增厚,差异均有统计学意义(P<0.05);高剂量内膜厚度厚于中、低剂量组(P<0.05)。4.血清相关激素浓度:E2、P、AMH激素浓度中青年组高于模型组,FSH、LH激素浓度中青年组低于模型组,差异均有统计学意义(P<O.05)。(1)E2、P激素浓度水平中,与模型组比较,各治疗组P激素浓度均有上升,E2激素高、中剂量组浓度上升,差异有统计学意义(P<0.05);E2激素浓度中高剂量高于中、低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);P激素中高剂量较中、低剂量组浓度高,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)FSH血清浓度中,与模型组比较,中、高剂量组FSH浓度降低,差异有统计学意义(P<0.05);低剂量组浓度降低,差异无统计学意义(P>0.05);中剂量组较高剂量浓度低,差异无统计血意义(P>0.05)。(3)LH血清浓度中,与模型组比较,高剂量组浓度较模型组降低(P<0.05),中剂量组降低无统计学意义(P<0.05);高剂量较中剂量浓度值降低明显,差异有统计学意(P<0.05)。(4)AMH血清浓度,与模型组比较,各给药组浓度升高,中、高剂量组、白凤丸组差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组差异有统计学意义(P<0.1);高剂量组浓度高于中剂量组,差异无统计学意义(P>O.05);高剂量组高于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。5.子宫内膜整合素β3及EMX2基因表达:整合素β3表达中,白凤丸组、各治疗组较模型组升高,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组表达高于低、中剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。EMX2表达中,白凤丸组、各给药组较模型组表达降低,差异有统计学意义(P<O.05);高剂量组表达低于低、中剂量组,差异有统计学意义(P<O.05)。
结论:1.五子调经方提高血清E2、P、AMH的浓度,降低FSH、LH水平,调整激素水平,改善卵巢储备功能;2.五子调经方能使子宫内膜增厚,改善子宫内膜状态;3.五子调经方能提高子宫、卵巢脏器系数;4.五子调经方能增加子宫内膜整合素β3基因表达、抑制EMX2基因的表达,改善子宫内膜的容受性。
方法:选用10-12月龄雌性大鼠,动情期延长为初老大鼠模型共55只,将其随机分为五子调经方低剂量组、五子调经方中剂量、五子调经方高剂量组、模型组对照组、乌鸡白凤丸阳性对照组;另设3-4月龄SD大鼠为青年空白对照组9只。各组连续给药20天后,观察各组大鼠的一般情况、子宫及卵巢脏器系数;采用HE染色法观察子宫内膜形态及厚度;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中E2、P、LH、FSH、AMH的浓度;采用实时定量基因扩增荧光检测方法(Real-time qPCR)检测大鼠子宫内膜容受因子整合素β3及EMX2基因的表达。
结果:1.一般情况:青年组、模型组大鼠予以生理盐水灌胃前后,一般情况无变化。给药组灌胃治疗后症状均有不同程度的改善,精神尚可,活动增加,毛发脱落较前少且有一定光泽。2.子宫、卵巢脏器系数观察:(1)大鼠子宫脏器系数:青年组子宫脏器系数高于模型组(P<0.05):与模型组比较,五子调经方高剂量组子宫脏器系数提高,差异有统计学意义(P<0.05),五子调经方中、低剂量组子宫脏器系数提高,差异无统计学意义(P>O.05);高剂量组与白凤丸组脏器指数比较,差异无统计学意义(P>O.05)。(2)卵巢脏器系数:青年组卵巢脏器系数高于模型组(P<0.05):与模型组比较,白凤丸组、五子调经方高、中剂量组卵巢脏器系数升高,差异有统计学意义(P<0.05),五子调经方低剂量组较模型组升高,差异无统计学意义(P>0.05);高剂量组卵巢脏器指数较低剂量组高,差异有统计学意义(P<0.05),中剂量组与高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.子宫内膜形态及厚度:(1)内膜形态方面,模型组子宫内膜薄,腺上皮细胞形态欠饱满、结构无序,腺体及血管数量较少;各给药组大鼠的腺上皮细胞柱状整齐饱满、腺体及血管数量较模型组均有增加。(2)内膜厚度方面,青年组子宫内膜厚度高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,白凤丸组、各治疗组内膜均增厚,差异均有统计学意义(P<0.05);高剂量内膜厚度厚于中、低剂量组(P<0.05)。4.血清相关激素浓度:E2、P、AMH激素浓度中青年组高于模型组,FSH、LH激素浓度中青年组低于模型组,差异均有统计学意义(P<O.05)。(1)E2、P激素浓度水平中,与模型组比较,各治疗组P激素浓度均有上升,E2激素高、中剂量组浓度上升,差异有统计学意义(P<0.05);E2激素浓度中高剂量高于中、低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);P激素中高剂量较中、低剂量组浓度高,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)FSH血清浓度中,与模型组比较,中、高剂量组FSH浓度降低,差异有统计学意义(P<0.05);低剂量组浓度降低,差异无统计学意义(P>0.05);中剂量组较高剂量浓度低,差异无统计血意义(P>0.05)。(3)LH血清浓度中,与模型组比较,高剂量组浓度较模型组降低(P<0.05),中剂量组降低无统计学意义(P<0.05);高剂量较中剂量浓度值降低明显,差异有统计学意(P<0.05)。(4)AMH血清浓度,与模型组比较,各给药组浓度升高,中、高剂量组、白凤丸组差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组差异有统计学意义(P<0.1);高剂量组浓度高于中剂量组,差异无统计学意义(P>O.05);高剂量组高于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。5.子宫内膜整合素β3及EMX2基因表达:整合素β3表达中,白凤丸组、各治疗组较模型组升高,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组表达高于低、中剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。EMX2表达中,白凤丸组、各给药组较模型组表达降低,差异有统计学意义(P<O.05);高剂量组表达低于低、中剂量组,差异有统计学意义(P<O.05)。
结论:1.五子调经方提高血清E2、P、AMH的浓度,降低FSH、LH水平,调整激素水平,改善卵巢储备功能;2.五子调经方能使子宫内膜增厚,改善子宫内膜状态;3.五子调经方能提高子宫、卵巢脏器系数;4.五子调经方能增加子宫内膜整合素β3基因表达、抑制EMX2基因的表达,改善子宫内膜的容受性。