第一部分ARID1A在正常脑组织及脑胶质瘤组织中的表达研究目的:检测ARID1A在人脑胶质瘤组织及正常脑组织的表达情况,分析ARID1A在胶质瘤中的表达情况及其与临床病理特征的相关性。方法:通过RT-PCR和Western blot的方法分别检测转录水平和蛋白表达水平人脑胶质瘤组织及正常脑组织的ARID1A表达情况,并检测ARID1A表达与胶质瘤患者的年龄、性别、KPS评分、病理级别及复发情况的相关性。结果:RT-PCR分析结果显示,胶质瘤组织ARID1A mRNA相对表达量(0.52±0.25)显著低于正常脑组织(1.23±0.14),差异显著(P﹤0.001),且胶质瘤中ARID1A mRNA的表达水平随着病理级别的上升而降低(P﹤0.05)。复发组胶质瘤组织(0.31±0.24)ARID1A表达低于未复发组(0.76±0.25),差异有统计学意义(P﹤0.001)。ARID1A与胶质瘤患者的年龄、性别和KPS评分无相关性。Western blot结果显示,ARID1A蛋白在正常脑组织中的表达水平高于脑胶质瘤组织,且随胶质瘤恶性程度的升高,ARID1A的蛋白表达水平不断降低。复发组胶质瘤组织(0.36±0.21)ARID1A蛋白相对表达量低于未复发组(0.71±0.23),差异有统计学意义(P﹤0.001)。第二部分ARID1A血清学表达与脑胶质瘤临床病理特征及预后的相关性研究目的:研究ARID1A基因在胶质瘤患者血清中的表达情况,探讨ARID1A在胶质瘤患者血清中的表达与临床病理特征关系及对预后的意义。方法:采用高效液相色谱法检测了83例胶质瘤血清样本和46例健康血清样品的ARID1A浓度,分析两者与胶质瘤临床病理特征(包括KPS评分、年龄、病理分级情况、性别、术前癫痫和肿瘤范围)及预后的关系。并分别对不同的KPS评分、年龄和病理分级情况的ARID1A表达进行了分层Kaplan-Meier分析。结果:脑胶质瘤患者血清中arid1a的浓度(44.98±11.87μg/ml)显著低于健康人(90.75±12.89μg/ml)。胶质瘤患者kps评分、年龄、病理分级情况与arid1a表达水平之间呈现具有显著相关性(p﹤0.05),其中较高的kps评分、较大的年龄、较高的病理分级与低水平的arid1a表达密切相关;而性别、术前癫痫、肿瘤范围与arid1a表达水平之间没有具有显著相关性(p﹥0.05)。kaplan-meier分析显示血清中arid1a低表达患者的总生存期短于arid1a高表达患者(对数秩检验,p=0.005)。分层kaplan-meier分析arid1a表达显示:kps<80分组、kps≥80分组、年龄<50岁组、年龄≥50岁组、病理i-ii级组和病理iii-iv级组的arid1a高表达患者总生存率均优于arid1a低表达患者。多因素分析结果显示,arid1a是胶质瘤患者预后的独立因素(p=0.002,hr=4.992,95%ci=1.831-13.611)。第三部分调节arid1a基因表达对人脑胶质瘤细胞侵袭与转移的影响及机制研究目的:研究arid1a与人脑胶质瘤细胞侵袭与转移的影响及其相关机制。方法:通过慢性病毒转染技术建立arid1a(rnai2801)稳定低表达的细胞系,同时通过质粒转化构建arid1a(wv0081)稳定过表达的细胞系。分别通过western-blot和qrt-pcr技术验证arid1a表达发生改变后,使用transwell法对细胞迁移和侵袭能力的改变进行研究;使用mtt法对细胞增殖能力的改变进行检测;流式细胞术检测细胞凋亡情况。此外,对arid1a表达发生变化后相关细胞中的p53和c-myc的表达变化进行研究;将转染前后的细胞接种于裸鼠体内构建成瘤模型,研究它们成瘤能力的改变。结果:建立了能够稳定上调和下调arid1a表达的细胞株。arid1a表达发生改变后,在体外实验中能够使得胶质瘤细胞的迁移、侵袭、增殖和凋亡能力发生显著变化;在体内实验中能够使得胶质瘤细胞的成瘤能力发生显著变化。arid1a上调后,p53基因表达显著上升,而c-myc基因表达显著下降;arid1a下调后,p53基因表达显著下降,而c-myc基因表达显著上升。结论:1 ARID1A基因可能在胶质瘤的发生发展中发挥着抑癌基因的作用。2 ARID1A低表达与胶质瘤的预后不良相关。3上调/下调胶质瘤细胞ARID1A的表达可以降低/提高胶质瘤的侵袭和转移能力。