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花椰菜(Brassica oleracea Var. botrytis),在全国各地广泛栽培,由于它具有丰富的营养和别具一格的风味,栽培面积迅速扩大,品种也越来越多,目前已基本实现了周年供应,在我国蔬菜周年生产中占有重要地位。然而,菜粉蝶、小菜蛾、夜蛾、菜螟等鳞翅目十字花科蔬菜害虫,在我国分布较普遍,为害严重,严重制约了花椰菜的周年生产。 植物基因工程的快速发展为抗性育种提供了一条崭新而有效的方法。Bt基因来源于苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt),其蛋白质产物对鳞翅目昆虫具有特异的毒杀作用而对高等动物和人无害。因此,将Bt基因导入花椰菜而获得抗虫种质成为可能。 本实验建立了花椰菜的再生、转化体系,并由此将Bt基因导入其中,主要结果如下: 1、对于花椰菜体外再生芽的诱导,6-BA和IAA配组能发挥很好的效果,外植体宜选用下胚轴而非子叶。 2、AgNO3抑制花椰菜芽的再生,相反,螯合银离子(silver thiosulfate,STS)能较好的被花椰菜吸收而促进芽的再生,通常29.4μM的STS就能发挥其最好的效应,过量则对芽有毒害作用。 3、在激素6-BA为2.0mg/l时,Nan160花椰菜下胚轴芽的诱导率可达到94.45%;而6-BA为1.0mg/l和IAA为0.1mg/l,并添加有STS 29.4μM时,Xue60和Xw55花椰菜下胚轴芽的诱导率分别为81.91%、77.80%。 4、10mg/l的卡那霉素(Kanamycin,Km)可完全抑制花椰菜绿芽的再生,不能分化出芽或只能分化出白色芽。 5、头孢霉素(Cefotaxime,cef)对芽的诱导有抑制作用。 6、看护培养能提高花椰菜的转化效率。其中,烟草细胞悬浮系较优于乙酰丁香酮(Acetosyringone,AS)。 7、对部分抗性植株提取DNA,经PCR、Southern杂交检测证明,Bt已整合进入花椰菜基因组中。目前,已获得了Nan160和Xue60花椰菜转基因植株。 8、对8株Nan160和2株Xue60花椰菜T0代转基因植株进行了初步室内抗小菜蛾幼虫鉴定。根据结果我们可以推断,毒素蛋白在转基因植株中已经表达,但表达量在不同的植株里存在着一定的差异。