目的：　　 1、建立人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1三维培养模型，为研究血管生成拟态(VM)形成的分子机制及针对VM的抗肿瘤疗法，提供有利的模型。　　 2、研究不同浓度的姜黄素(Cur)对OCM-1细胞株VM形成的影响，探讨Cur是否可以通过抑制磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号通路抑制VM的形成，以达到抗肿瘤的作用。为Cur抗肿瘤的临床应用及其作用机制的深入研究提供科学依据。　　 方法：　　 1、实验第一部分：体外三维培养OCM-1细胞，并进行过碘酸一雪夫氏反应(PAS)染色，观察PAS阳性的环状结构的形成，即其形成VM的能力。　　 2、实验第二部分：观察不同浓度(0 umol/L、10umol/L、20umol/L、30umol/L、40umol/L)的Cur对OCM-1细胞株形成VM能力的影响，通过进行PAS染色，观察姜黄素对PAS阳性的环状结构的形成能力的影响，通过免疫细胞化学染色检测参与VM形成PI3K与上皮受体酪氨酸激酶(EphA2)的表达并初步探讨Cur抑制VM形成的机制。　　 3、所得结果输入SPSS16.0统计软件进行分析。　　 结果：　　 1、OCM-1细胞三维培养模型的建立：OCM-1细胞三维培养后4天，细胞大部分呈多角形，胞浆较丰富，核圆形，可见核仁，少部分肿瘤细胞长梭形，可见三五个长梭形细胞彼此连接围成半环状结构。一周后，肿瘤细胞几乎均变成长梭形，沿着胶原支架生长，细胞伸出长的突起，彼此之间相互接触围成环状结构。经PAS染色可见，瘤细胞大多呈弥散排列，肿瘤细胞模仿机体血管生成而形成瘤细胞条索并围成管道，一层细胞外基质(PAS阳性物质)围成环状结构。　　 2、形态学观察Cur对OCM-1细胞形成VM结构的影响：Cur0umol/L组：OCM-1细胞有浸润，在鼠尾胶上叠加生长，随着时间的延长，部分细胞逐渐伸展、变形，呈长条状、梭状或弧状；一周后细胞与细胞之间相互连接，并可成为管状、腔样、树枝样、网状等管腔结构，即V M；Cur10umol/L组：部分OCM-1细胞能够形成条梭状和长条形，形成V M；Cur20umol/L组：部分OCM-1细胞能形成长条形和梭形，但不能形成VM；Cur30umol/L组：大部分细胞呈圆形，少细胞能形成长条形和梭形，但不能形成V M；Cur40umol/L组细胞皱缩成圆形，不能形成VM。　　 3、PAS染色观察Cur对OCM-1细胞VM形成的影响：Cur0umol/L组：部分肿瘤细胞表达P A S阳性物质，相互连接形成环状、管腔样，网格状结构，即V M；Cur10umol/L组：部分OCM-1细胞能够形成条梭状和长条形，PAS阳性，形成网格状V M结构；Cur20umol/L组：少部分OCM-1细胞能形成长条形和梭形，PAS阳性，形成网格状VM结构；Cur30umol/L：大部分细胞呈圆形，PAS阴性，少部分细胞能形成长条形和梭形，PAS阳性，但不能形成网格状VM结构；Cur40umol/L组细胞皱缩成圆形，PAS阴性，不能形成网格状VM结构。　　 4、免疫组织化学检测Cur对OCM-1细胞EphA2和PI3K蛋白表达的影响：EphA2和PI3K蛋白表达，Cur(10、20、30、40umol/L)组，呈浓度依赖性降低，抑制VM的最佳浓度为30umol/L。各组分别与Cur0umol/L组比较，差异有统计学意义(P=0.000)，其中30umol/L和40umol/L比较，差异无统计学意义(P=0.300；P=0.188)。　　 结论：　　 1、我们建立的脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1三维培养模型是以鼠尾胶原蛋白Ⅰ型为支架，从形态学和PAS染色两个方面观察到环状结构即VM的存在，为研究VM形成的分子机制及抗VM的抗肿瘤疗法，提供了有利的体外研究模型，也为本课题的进一步研究打下了基础。　　 2、Cur对OCM-1细胞株形成VM管道结构的能力具有抑制作用，且呈浓度依赖性，Cur浓度达到30umol/L时，其对OCM-1细胞株VM的形成具有明显的抑制作用。　　 3、Cur抗瘤作用明确，结合文献及本实验研究，其机制可能是通过抑制PI3K信号通路从而抑制VM的形成。为Cur抗肿瘤的临床应用及其作用机制的深入研究提供实验依据。