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背景：蛇床子的有效成分为香豆素类化合物，其中含量最高的两种香豆素类化合物为蛇床子素（Osthole, Ost）、欧前胡素（Imperatorin, Imp）。但目前大多数对蛇床子以及Ost、Imp两种香豆素单体的研究报道集中在它们的药效方面，对其药代动力学及代谢途径的研究就比较局限。本课题预期通过对Ost及Imp体外代谢情况的研究，丰富对蛇床子总香豆素主要有效组份的认识，阐明参与药物代谢的酶，评价药物与代谢酶间的相互作用，为理解药物代谢的机制、预测药物相互作用和药物代谢多态性以及指导临床合理用药提供理论依据。目的：通过肝微粒体体外代谢研究法研究中药蛇床子中的有效单体蛇床子素（Ost）、欧前胡素（Imp）在大鼠和人肝微粒体中的代谢途径和机制，探明Ost，Imp在大鼠和人肝微粒体中的酶促动力学特征，以及CYP450酶抑制剂对Ost，Imp代谢的影响，明确参与Ost和Imp在大鼠和人肝微粒体中代谢的相关CYP450酶。丰富对蛇床子总香豆素主要有效组份的认识，为更深入地研究其药代动力学及临床上合理用药提供理论和实验依据。方法：1、建立Imp，Ost的HPLC-UV检测方法。2、通过温孵时间、肝微粒体浓度、底物浓度三个方面来考察Imp在大鼠和人肝微粒体中的酶促动力学特征。3、研究CYP3A4抑制剂酮康唑、CYP2D6抑制剂奎尼丁、CYP2C9抑制剂磺胺苯吡唑、CYP2C8抑制剂甲氧苄氨嘧啶、CYP1A2抑制剂α-萘黄酮对Imp在大鼠和人肝微粒体中代谢的影响。4、通过温孵时间、肝微粒体浓度、底物浓度三个方面来考察Ost在大鼠和人肝微粒体中的酶促动力学特征。5、研究CYP3A4抑制剂酮康唑、CYP2D6抑制剂奎尼丁、CYP2C9抑制剂磺胺苯吡唑、CYP2C8抑制剂甲氧苄氨嘧啶、CYP1A2抑制剂α-萘黄酮对Ost在大鼠和人肝微粒体中代谢的影响。结果：1、建立了检测肝微粒体中欧前胡素（Imp）和蛇床子素（Ost）的高效灵敏HPLC方法。2、Imp在大鼠和人肝微粒体中37℃，120rpm的情况下进行孵育，在5-30min均呈线性消除，故选择的孵育时间为30min；在0.05-0.20mg/ml范围内，Imp的消除随肝微粒体蛋白浓度增加而加快，故确定肝微粒体浓度均为0.2mg/ml。在0.8-12.8μM浓度范围内，Imp的代谢消除量随底物浓度的增加呈近似线性的增加，当Imp浓度达到25.6μM时，它的代谢均呈饱和状态，这些均表示Imp在大鼠和人肝微粒体的代谢符合典型的酶促动力学特征。根据Eadie-Hofstee方程计算Imp在大鼠和人肝微粒体中的酶促动力学参数。在大鼠肝微粒体中：Vmax=31.50±1.32nmol/min/pmol, Km=18.34±1.07μM, Clint=1.72±0.11mL/min/pmol；在人肝微粒体中：Vmax=41.37±5.12nmol/min/pmol, Km=14.64±1.91μM, Clint=2.83±0.36mL/min/pmol。3、甲氧苄氨嘧啶、α-萘黄酮明显抑制了低中高三个浓度的Imp在大鼠肝微粒体中的代谢。进一步在人肝微粒体考察表明α-萘黄酮也能明显抑制了低中高三个浓度的Imp的代谢，同时奎尼丁对低浓度Imp的代谢以及甲氧苄氨嘧啶对高浓度Imp的代谢也有抑制作用。4、Ost在大鼠和人肝微粒体于37℃，120rpm/min的情况下进行孵育，在5-20min均呈线性消除，故选择的孵育时间为20min；在0.05-0.20mg/ml范围内，Ost的消除随肝微粒体蛋白浓度增加而加快，故确定肝微粒体浓度为0.2mg/ml。在1.6-19.2μM浓度范围内，Ost的代谢消除量随底物浓度的增加呈近似线性的增加，当Ost浓度达到38.4μM时，它的代谢呈饱和状态，这些均表示Ost在大鼠和人肝微粒体的代谢符合典型的酶促动力学特征。根据Eadie-Hofstee方程计算Ost在大鼠和人肝微粒体中的酶促动力学参数。在大鼠肝微粒体中：Vmax=6.58±0.76nmol/min/pmol, Km=51.17±6.32μM, Clint=7.76±1.01mL/min/pmol；在人肝微粒体中：Vmax=4.36±0.37nmol/min/pmol, Km=36.49±4.21μM, Clint=8.35±1.21mL/min/pmol。5、酮康唑对低中高三个浓度的Ost在大鼠肝微粒体中的代谢均有抑制作用；进一步在人肝微粒体中考察，结果表明酮康唑对低中高三个浓度的Ost有抑制作用，同时奎尼丁和磺胺苯吡唑也能抑制高浓度的Ost在人肝微粒体中的代谢。结论：1、建立了灵敏可靠的检测肝微粒体中蛇床子素（Ost）和欧前胡素（Imp）的HPLC法。2、Ost和Imp在大鼠和人肝微粒体中的代谢均符合典型的酶促动力学特征。3、CYP1A，CYP2C介导了低中高三个浓度Imp在大鼠肝微粒体中的代谢；同时CYP1A2也参与了低中高三个浓度Imp在人肝微粒体中的代谢，CYP2D6参与了低浓度Imp以及CYP2C8参与了高浓度Imp在人肝微粒体中的代谢。CYP3A介导了低中高三个浓度Ost在大鼠肝微粒体中的代谢；同时CYP3A4介导了Ost在人肝微粒体中的代谢， CYP2D6和CYP2C9也参与了高浓度的Ost在人肝微粒体中的代谢。