背景与目的胸腺是中枢免疫器官,是T淋巴细胞发育分化成熟的重要器官。正常的胸腺功能对人体免疫功能的维持十分重要。如果人体的免疫平衡被打破,就可能引发各种免疫性疾病。淋巴细胞执行人体的免疫功能,对人体的免疫状况起着非常重要的作用,主要包括T细胞、B细胞、NK细胞、NKT细胞等。近年来,对淋巴细胞的分化和功能、以及与疾病发生关系的研究报道很多,在某些方面也有显著进展。其中趋化性细胞因子在淋巴细胞发育、分化、成熟、及其功能上的作用,越来越受到关注。淋巴细胞的发育受多种细胞表面分子和细胞因子的调控,趋化因子(chemokines)是一类对细胞具有趋化作用的细胞因子,能直接引导白细胞定向迁移,并具有活化和迁移细胞的功能。淋巴干/祖细胞由骨髓经血液向胸腺的迁移和定植、成熟淋巴细胞归巢和动态分布、各种免疫细胞的分化、活化等均受到趋化因子的影响和调节。重症肌无力是由抗体介导的,与T淋巴细胞和免疫功能异常相关的自身免疫性疾病。已有研究报道,多数MG患者胸腺细胞异常增生,胸腺细胞亚群比例异常。胸腺组织中出现淋巴结样的T细胞区和富含B细胞的生发中心是MG患者胸腺异常增生的典型病理改变,且从MG增生型胸腺组织分离纯化的B细胞能产生抗乙酰胆碱受体(AchR)抗体,胸腺切除后抗AchR抗体滴度降低,患者症状好转。为探讨MG患者胸腺中胸腺细胞亚群异常及B细胞生发中心形成的原因,本文通过基因芯片、荧光定量PCR、趋化实验、流式细胞术和免疫组化等方法对MG患者胸腺组织趋化因子及其受体的异常表达和作用进行了分析。旨在比较MG患者和正常对照组胸腺组织中趋化因子及其受体的表达情况,探讨趋化因子及其受体在MG患者胸腺组织的异常表达和作用。方法1研究对象：MG患者12例,胸腺组织病理类型为增生型；先天性心脏病患者10例,胸腺组织病理检查未见异常,做为对照。2胸腺组织趋化因子及其受体mRNA的基因芯片分析：无菌取MG患者和先心病患者手术切除的胸腺组织,提取总RNA,而后将其反转录成cDNA,再进行体外转录合成生物素标记的cDNA,并与基因芯片进行杂交,通过化学发光法检测MG患者和正常胸腺组织的基因表达情况,筛选出差异性表达的趋化因子及其受体。3荧光定最PCR验证趋化因子及其受体的表达：提取胸腺组织总RNA,将其反转录合成cDNA,从芯片结果差异性表达的趋化因子及受体中选取几种,采用荧光定量PCR对芯片结果进行验证。4MG患者胸腺组织趋化因子CCL25的分布情况：制作胸腺组织石蜡切片,采用免疫组化方法检测趋化因子CCL25在MG和正常胸腺组织表达的差异。5胸腺组织提取液对胸腺细胞的趋化作用：从胸腺组织中无菌分离制备胸腺细胞悬液和胸腺组织提取液,采用趋化实验和流式细胞术观察MG患者胸腺组织提取液对MG胸腺细胞的趋化作用,与正常胸腺组织提取液对正常胸腺细胞的趋化作用对比,对两者的趋化指数进行比较分析。6MG患者外周血淋巴细胞表达趋化因子受体CCR9水平：无菌制备外周血淋巴细胞悬液,采用流式细胞术观察病例组和对照组淋巴细胞亚群和趋化因子受体CCR9的表达情况。结果1MG患者胸腺趋化因子及其受体mRNA的表达：基因芯片结果显示,在检测的70种趋化因子及其受体中,有49种基因在MG患者和对照组胸腺组织表达量均低,有21种基因在MG和对照组胸腺呈显著表达。通过对显著表达基因的对比分析,发现CCL3、CCL22、CCL25、CCR7、CCR9、CXCL12基因在MG患者胸腺表达显著高于对照组,CCL2、CX3CL1、CXCL10、CXCR6、IL-8基因在MG患者胸腺组织表达显著低于对照组。对差异表达基因进行荧光定量PCR验证,结果与基因芯片基本相符。2胸腺组织CCL25的表达：免疫组化结果显示,与正常胸腺组织相比,趋化因子CCL25在MG胸腺组织呈现高表达,且主要表达于皮髓交界处胸腺基质胞。3胸腺组织提取液对胸腺细胞的趋化作用：MG胸腺提取液对CD8+单阳性细胞有较强的趋化作用；用SPSS17.0对MG组和正常对照组趋化指数进行两组独立样本的t检验进行统计分析显示,MG组的趋化指数显著高于对照组,P<0.05,具有统计学意义。4外周血淋巴细胞CCR9表达：流式结果分析显示,外周血淋巴细胞上CD4+CCR9-细胞在MG组显著高于正常对照组,CD8+CCR9+、CD19+CCR9+细胞在MG组均显著低于正常对照组。结论MG患者胸腺组织中存在趋化因子及其受体的表达异常,CCL25及其受体CCR9可能是与MG患者胸腺细胞异常增生相关的关键分子。