p53,是一种重要的肿瘤抑制基因(tumor suppressor gene),同时也是一种重要的转录调控因子,其通过调控一系列不同的靶基因来发挥其不同的生理功能,如诱导细胞凋亡、参与细胞周期调控以及抗病毒反应等。NF-κB是一种重要的转录因子,能够调节一系列基因表达参与细胞增殖分化、炎症反应、先天免疫以及凋亡等生理过程。PKR是先天免疫抗病毒信号通路中一种重要的效应蛋白,且作用机制研究的比较透彻。鱼类p53在先天免疫中的作用也逐渐被报道。但对于p53与NF-κB、PKR之间的相关研究报道甚少。因此,本文主要为了研究p53所介导的NF-κB/PKR两者之间的转录调控机制,从而进一步表明p53在鱼类先天免疫反应的重要地位。为了研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)p53(Cip53)在先天免疫信号通路中的转录调控机制,我们首先克隆与鉴定了草鱼p53基因的全长cDNA序列(KX871190)及其启动子序列。Cip53全长cDNA为1879bp,包括1个146bp的5’非翻译区、1个617bp的3’非翻译区和1个编码371个氨基酸的1116bp的开放阅读框;Cip53蛋白结构包含一个DNA结合区域与位于C端的寡聚化区域。Cip53启动子为距离转录起始位点上游991bp的序列,其中包括Rel-A、IRF3、XBP-1及p53潜在调控位点。通过荧光定量PCR实验,我们分析了在poly I:C刺激之后p53在草鱼不同组织以及草鱼肾细胞(CIK)中的表达特征。实验结果表明Cip53在草鱼所测各个组织(脑、眼、皮、鳃、脾、肾)中,在6h与24h、48h均出现表达上调;且在CIK细胞中刺激6h后出现大幅度上调。另外,通过体外非放射性凝胶阻滞实验分析了Cip65蛋白与Cip53启动子的亲和性以及Cip53蛋白与Ci PKR启动子的亲和性,结果分别表明Cip65能够明显阻滞Cip53启动子片段迁移,且Cip53能够明显阻滞Ci PKR启动子片段迁移。说明Cip53能够被Cip65所调控,且Cip53是CiPKR潜在的转录调控因子。本研究还通过构建了真核表达载体pCDNA3.1-Cip65与pGL-Cip53启动子报告载体以及pCDNA3.1-Cip53与pGL-CiPKR,然后分别瞬时转染于CIK细胞中,双荧光素酶活性实验结果表明Cip65能够激活Cip53的转录且Cip53能够显著激活CiPKR的转录。为了进一步分析Cip53在Cip65与CiPKR之间的转录调控关系,本研究还通过设计了敲降Cip53的si RNA,通过干扰实验结果表明,在Cip53在转录水平被显著敲低后,Cip65与CiPKR的转录水平也显著降低。表明p53参与了NF-κB和PKR所介导抗病毒转导途径。综上所述,通过对Cip53在先天免疫信号通路的转录机制分析,体现了Cip53在鱼类抗病毒作用过程的重要地位。