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本研究拟采用单链构象多态性(SSCP)的方法分析三个常见的突变位点在中国人FHM家族中的表现形式.以进一步探讨CACNA1A与FHM之间的关系.[材料和方法]1.研究对象:1)FHM病人组:家系A三代共8个患者(6女,2男),其中6个参加实验;家系B三代共4个患者(4女),均参加实验.2)FHM亲属组:家系A和B共12人.3)无FHM家族史的偏头痛病人组:共53例有先兆偏头痛,其中男性17例,女性36例.4)健康对照组:共8名女性,2名男性健康对照,年龄与FHM相匹配.5)以上所有患者均根据国际头痛学会(International Headache Society,IHS,1988年)分为无先兆的偏头痛(Migraine without aura)和有先兆的偏头痛(Migraine with aura)[1].2.实验方法:2.1.引物的设计合成:应用生物信息学,从Genebank中查阅CACNA1A基因的mRNA和第13、16、17外显子的序列,根据引物设计原则,并利用Primer 5.0设计软件,设计出扩增13、16和17外显子的引物.设计的引物均位于各个外显子相邻的内含子上,因此扩增的片段包括整个外显子序列.2.2.基因组DNA的提取:酚/氯仿抽提法.2.3.PCR扩增CACNA1A基因的第13、16、17外显子:第13,第16及第17个外显子的反应条件均为:94℃4分钟预变性,94℃1分钟,55℃30秒,72℃45秒,共35个循环,72℃延伸6分钟.反应后检测,取8 u lPCR扩增产物用2﹪的琼脂糖凝胶进行电泳.2.4.SSCP方法分析突变:常规进行凝胶制备和PCR产物样品准备.然后进行电泳及银染显影.